中华按蚊拟除虫菊酯杀虫剂抗性研究

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1、万方数据学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书两使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承握本声明的法德责任。论文作者签名：固期：，}修11·／万方数据学位论文使用授权声明』』IIIIIII／llIIIIIIIII／llIIJ、‘Y2742666本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容

2、和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：塑丝曰导师签名：期：弘陬ff‘／，园期：≯l，哆t卜f万方数据中华按蚊拟除虫菊酯杀虫剂抗性研究中文摘要疟疾是全球最重要的寄生虫病之一，媒介防制是疟疾控制和消除阶段的最有效的技术措施之一。目前媒介

3、防制中应用最为广泛的是化学防治的方法，而化学防治中主要依靠杀虫剂的成蚊控制措施。拟除虫菊酯类杀虫剂由于其高效、低毒、经济等优点，不仅已成为疟疾媒介防制措施中杀虫剂室内滞留喷洒(IRS)、杀虫剂浸泡蚊帐(ITN)和杀虫剂处理长效蚊帐(LLIN)的首选杀虫剂，而且在其他公共卫生领域也被广泛使用。同时，拟除虫菊酯类杀虫剂也是农业领域应用最广泛的杀虫剂。然而随着杀虫剂的长期和广泛使用，杀虫剂抗性在全球迅速蔓延，目前按蚊几乎对所有种类的杀虫剂都有抗性报道。除加快新型杀虫剂或杀虫剂新剂型研发外，延缓杀虫剂抗性的发展和扩散也是最经济、有效的方法之一。而对杀虫剂抗性机制的了解是我们正确、有效地选

4、择和使用杀虫剂，从而能延缓杀虫剂抗性的发展和扩散的基础。本研究以目前国内分布最为广泛的传疟媒介～中华按蚊为研究对象，通过现场采集野外中华按蚊样本，检测其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性水平和击倒抗性(kdr)突变频率；通过实验室选育拟除虫菊酯类杀虫剂抗性中华按蚊和观察现场按蚊在实验室驯化过程中抗性水平和抗性基因突变频率的变化进一步了解其对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性产生的可能机制；通过对中华按蚊拟除虫菊酯类杀虫剂抗性和敏感群体的转录组基因分析、抗性相关基因的分布及聚类特征分析，进行杀虫剂抗性基因的筛选，为今后开展抗性关键因子的鉴定和功能研究奠定基础。第一部分野外中华按蚊拟除虫菊酯杀虫剂抗性水

5、平和kdr突变频率的检测目的：了解现场采集的野外中华按蚊拟对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性水平和kdr突变频率。方法：分别从江苏省4个地区现场采集4龄期按蚊幼虫或蛹，经形态学和分子鉴万方数据中文摘要中华按蚊拟除虫菊酯杀虫剂抗性研究定后，对确认为中华按蚊的样本进行实验室饲养，待其羽化为成蚊后3—4天，分别采用世界卫生组织(wHO)推荐的生物接触筒法，测定其对溴氰菊酯杀虫剂的抗性水平；采用本课题组前期建立的AS—PCR的方法，检测不同抗性表型中华按蚊的kdr突变水平和突变频率。结果：4个地区现场采集的中华按蚊接触溴氰菊酯杀虫剂24h后的死亡率均低于10％，远低于死亡率<90％的WHO判定抗

6、性标准；AS-PCR检测发现野外中华按蚊种群kdr突变频率很高(88．2％一100％)；发现野外捕获中华按蚊种群存在TGT、TTT、TTC3种kdr突变基因型和L1014C和L1014F2种kdr突变型；新发现野外捕获的中华按蚊经实验室驯化饲养1—2年后，不仅杀虫剂抗性水平迅速回落，而且kdr突变也随之消失。第二部分现场中华按蚊拟除虫菊酯杀虫剂抗性群体的选育目的：选育并建立中华按蚊拟除虫菊酯杀虫剂抗性品系；分析抗性群体选育过程中抗性水平和kdr,P450s、GST等指标的变化，并探讨中华按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性产生和发展的机理。方法：收集现场饱血按蚊亲代样本，经形态学和分子鉴

7、定确认为中华按蚊后，对其子代3—4日龄嚣有雌雄成蚊均进行溴氰菊酯杀虫剂逐代选育直至抗性维持在较稳定的水平；同时采用人工强迫交配法以提高按蚊交配率和产卵率；利用新建的A11Glo—qPCR法对逐代杀虫剂抗性选育后的成蚊进行kdr突变水平和突变频率的检测，同时对选育群体进行P450s和GSTs等代谢解毒酶的活性进行检测。结果：现场按蚊在经过2代杀虫剂处理后的选育群体kdr突变频率就达到100％，TTT是其中最主要的突变基因型(L1014F)；其抗性水平随着杀虫剂处理每一代稳步上升，但