中华按蚊抗药性及种群遗传研究

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1、分类号：密级：单位代码：10312学号i20112015南京医科犬学博士学位论’文研究生：指导教师：学科专业：学院名称：完成时间：常雪莲朱昌亮病原生物学南京医科大学基础医学院二。一四年四月南京医科大学博士学位论文南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特另dDl：i以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明

2、的法律后果由本人承担。作者签名：。等-G雪莲日期：2。I怿6月f。日导师筌步讲锄参日期∞心年G月(。日学位-iA>文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“4”)：1、保密口，在一年解密后适用本授权书。2、不保密哦日期：

3、blct-年6月fo日日期舻叶年G月kb日南京医科大学博士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6第一部分中华按蚊对多种杀虫剂抗性检测材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(一)蚊采集与饲养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(二)主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11(三)主要溶液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、12(四)主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··13(一)中华按蚊抗性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13(二)中华按蚊抗性相关靶标基因多态性检测⋯⋯⋯⋯14(三)中华按蚊多种杀虫剂代谢酶活性检测⋯⋯⋯⋯⋯20(四)中华按蚊种群抗性机制综合分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24一、中华按蚊抗性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··24二、中华按蚊抗性相关靶标基因多态性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯··25(一)

5、中华按蚊分子鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25南京医科大学博士学位论文(二)中华按蚊kdr基因多态性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·26(三)中华按蚊ace．J基因多态性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·30三、中华按蚊多种杀虫剂代谢解毒酶活性检测⋯⋯⋯⋯⋯··33(一)种群细胞色素氧化酶活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33(二)种群谷胱甘肽转移酶活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34(三)种群羧酸酯酶活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35四、中华按蚊种群抗性机制综合分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··36讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯42第二部分基于线粒体DNA序列分析中华按蚊抗性相关的种群遗传结构材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50(一)蚊采集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50(二)主要试剂与溶液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52(三)主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一52(一)中华按蚊kdr基因突变检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-52(二)中华按蚊线粒体∞J、cD川基因片段扩增⋯⋯

7、-·53(--)序列测定与数据分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56南京医科大学博士学位论文一、中华按蚊kdr基因突变检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一56二、线粒体∞o、eo-II联合序列对种群遗传结构分析⋯⋯··56三、线粒体co-I、co-II联合序列对种群系统发育分析⋯⋯一62讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．70参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72缘I述

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．83附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．98攻读学位期间发表文章情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯114致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯115南京医科大学博士学位论文中文摘要蚊是世界性分布的卫生害虫，不仅吸血骚扰，而且传播多种疾病，严重危害人类健康。疟疾即为媒介按蚊携带疟原虫传播到人体内而引起的疾病，属于重要的蚊媒传染病。媒介按蚊控制主要是使用杀虫剂化学防制，然而杀虫剂长期大范围的使用导致蚊产生抗药性。抗药性己成为当前蚊媒控