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1、抗人羧酸酯酶论文.freelonoclonalantibodyagainsthumancarboxylesterasesⅡAbstractAIM:Topreparemonoclonalantibody(mAb)againsthumancarboxylesterasesⅡ(hCEⅡ)andcharacterizeitsproperties.METHODS:BALB/cmicemunizedanlivermicrosomeproteinAbatechniqueandpurifiedbyproteinGaffinitychromatography.Thet
2、iterandspecificityofmAbmunohistochemicalstaining.Antigenassfingerprint(PMF)matchedanproteindatabase.PMFmunoprecipitationandmatrixassistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry(MALDITOFMS).RESULTS:OnecloneofhybridomasecretingspecificmAbagainsthCEⅡAbAbmunohistoche
3、mistrydemonstratedthatthemAbhadspecialbinationprotein,butnotoothmusclecellprotein.ImmunoprecipitationshoityedtobehCEⅡafterbeinganalyzedassspectrometry.CONCLUSION:ThemAbagainsthCEⅡancarboxylesterasesⅡ;monoclonalantibody;matrixassistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspe
4、ctrometry摘要目的:制备鼠抗人羧酸酯酶Ⅱ（humancarboxylesterasesⅡ,hCEⅡ）单克隆抗体（mAb）并对其特性进行鉴定。方法:以含hCEⅡ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCEⅡ的mAb,并用ProteinG亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,.freelAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrixassistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightm
5、assspectrometry,MALDITOFMS）得到相应的肽质量指纹谱（peptidemassfingerprint,PMF）,再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果:获得1株可持续、稳定分泌抗hCEⅡ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类（型）为IgG1（κ）,腹水mAb的效价达1×10-7。r为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合（hCEⅡ存在于肝细胞浆内微粒体）,而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCEⅡ的M
6、r相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCEⅡ。结论:制备出的鼠抗hCEⅡ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCEⅡ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。关键词人羧酸酯酶Ⅱ;单克隆抗体;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在蛋白质组学研究中,单克隆抗体（mAb）及其相关技术在蛋白质分子的定性、定量、定位、蛋白翻译后修饰及蛋白蛋白相互研究中具有不可替代的作用。因而蛋白质组学的研究需要很多特异性好、高质量的mAb。本研究描述了用混合的人肝微粒体蛋白作抗原制备其鼠源性杂交瘤的策略。mAb对应的抗原是用免疫沉淀和基
7、质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOFMS）得到相应的肽质量指纹谱（peptidemassfingerprint,PMF）,再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定的。人羧酸酯酶Ⅱ（carboxylesterasesⅡ,EC3.1.1.1,hCEⅡ）是羧酸酯酶亚家族中的成员,由550个氨基酸组成,相对分子质量（Mr）为61807。羧酸酯酶属于B族脂酶,为一种丝氨酸酶,在肝脏、小肠、结肠、心脏、脑、睾丸及肾脏等组织中均有表达。血清中的hCEⅡ主要在肝脏中合成,并通过高尔基体分泌到血循环中1。最近研究表明,hCE可作为肝癌的新标志物2
8、。由于目前国际市场上还没有抗hCEⅡ的mAb的销售,为此,我们应用杂交瘤技术,制备了抗hCEⅡ的mAb,并进
