T∕CSTEA 00052-2022 茶叶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

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ICS67.140.10CCSX55团体标准T/CSTEA00052-2022茶叶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determinationofhexachlorophene,dinosamanddinexResiduesinteaLiquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod2022-10-08发布2022-10-08实施海峡两岸茶业交流协会发布

1T/CSTEA00052—2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由福建省产品质量检验研究院提出。本文件由海峡两岸茶业交流协会归口。本文件起草单位：福建省产品质量检验研究院、武夷星茶业有限公司、华祥苑茶业股份有限公司、福建品品香茶业有限公司、国家茶叶质量监督检验中心(福建)、宁德市产品质量检验所、武夷山市食品卫生监督检验中心、熹茗集团有限公司、武夷山市桃渊茗茶叶科学研究所有限公司、厦门市产品质量监督检验院、福建农林大学、福建中检华日食品安全检测有限公司、睿科集团（厦门）股份有限公司。本文件主要起草人：孟鹏、黄芊、段联勃、张雪波、谢基雄、何丽梅、王征、王兴进、戴明、衷兴旺、陈巧、林伟琦、林钦、詹重清、刘文菁、林松、晁倩林、陈劲星、胡云飞、张建强、高希、黄力群。I

2T/CSTEA00052—2022茶叶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了绿茶、红茶、白茶、乌龙茶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚残留量的液相色谱-串联质谱法的测定方法。本文件适用于绿茶、红茶、白茶、乌龙茶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚残留的定性鉴别及定量测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有术语和定义。4原理试样用乙腈提取，提取液经分散固相萃取净化，液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。5试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，所有试验用水均为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1乙腈（CH3CN,CAS号：75-05-8）。5.1.2乙腈（CH3CN,CAS号：75-05-8）：色谱纯。5.1.3甲醇（CH3OH,CAS号：67-56-1）：色谱纯。5.1.4氯化钠（NaCl,CAS号：7647-14-5）。5.1.5乙酸钠（CH3COONa,CAS号：6131-90-4）。5.1.6乙酸（CH3COOH,CAS号：55896-93-0）。5.1.7无水硫酸镁（MgSO4,CAS号：7487-88-9）。5.1.8乙酸铵（C2H7NO2,CAS号：631-61-8）。5.2溶液配制5.2.1水溶液（含10mmol/L乙酸铵，0.01%乙酸）：称取0.7708g乙酸铵，加入100μL乙酸，用超纯水溶解并稀释至1000mL，摇匀。1

3T/CSTEA00052—20225.3标准品毒菌酚（Hexachlorophene，C13H6Cl6O2，CAS：70-30-4)、戊硝酚（Dinosam，C11H14N2O5，CAS：4097-36-3)、消螨酚（Dinex，C12H14N2O5，CAS：131-89-5)，纯度均≥95%。5.4标准溶液配制5.4.1标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取10mg（精确至0.1mg）标准品，乙腈溶解并定容至10mL，避光-18℃保存，有效期1年。5.4.2混合标准溶液：吸取一定量的农药标准储备溶液于容量瓶中，用乙腈（5.1.2）定容至刻度。混合标准溶液避光0℃～4℃保存，有效期1个月。5.5材料5.5.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40μm～60μm。5.5.2十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40μm～60μm。5.5.3石墨化炭黑（GCB）：40μm～120μm。5.5.4陶瓷均质子：2cm（长）×1cm（外径），或相当者。5.5.5微孔滤膜（有机相）：13mm×0.22μm，或相当者。6仪器与设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2全自动QuEChERS实验仪。6.3分析天平：感量0.1mg和0.01g。6.4离心机：转速不低于4200r/min。6.5组织捣碎机。6.6涡旋混合器。7试样制备7.1试样制备取茶叶约500g，室温下粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。7.2试样贮存将试样按照测试和备用分别存放。于-18℃条件下保存。8分析步骤8.1样品前处理8.1.1传统QuEChERS净化法称取2g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加10mL水涡旋混匀，静置30min。加入10mL乙腈、6g无水硫酸镁、1.5g乙酸钠及1颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡1min后4200r/min离心5min。吸取一定量上清液至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中（每毫升提取液使用150mg无水硫酸镁、50mgC18、50mgPSA和25mgGCB），涡旋混匀1min。4200r/min离心5min，吸取上清液过微孔滤膜（5.5.5），用于测定。2

4T/CSTEA00052—20228.1.2自动QuEChERS净化法称取2g试样（精确到0.01g）于50mL具塞离心管，放入全自动QuEChERS实验仪（6.2）中，设置实验方案（样品中加入10mL超纯水及1颗陶瓷均质子，剧烈震荡1min，加入10mL乙腈，剧烈震荡3min，再加入6g无水硫酸镁、1.5g乙酸钠，涡旋混匀后离心。取4mL样液至含600mg无水硫酸镁、200mgC18、200mgPSA和100mgGCB的QuEChERS净化管中，剧烈振荡1min后离心），运行实验方案，待仪器停止后取出净化管，取上清液过微孔滤膜（5.5.5），用于测定。8.2测定条件8.2.1液相色谱测定参考条件液相色谱测定参考条件如下：a）色谱柱：WatersHSST3柱（2.1×50mm，1.8μm）或相当者；b）流动相：A相为水溶液（含10mmol/L乙酸铵，0.01%乙酸），B相为甲醇。流动相梯度条件见表1；c）流速：0.4mL/min；d）柱温：40℃；e）进样量：5μL。表1流动相及其梯度条件时间（min）流动相A（%）流动相B（%）060400.560403.010905.010905.160406.560408.2.2质谱参考条件质谱参考条件如下：a）离子源类型：电喷雾离子源；b）扫描方式：负模式扫描；c）电喷雾电压：-4500V；d）离子源温度：550℃；e）雾化气：50psi；f）辅助加热气：50psi；g）气帘气：35psi；h）多反应监测：每种农药分别选择一对定量离子，一对定性离子。每组所有需要检测离子对按照出峰顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、定量离子对、定性离子对和离子对质谱参数，参见附录A。8.3基质标准工作曲线精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用空白基质溶液释成质量浓度为0.001mg/L、0.002mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L的标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以农药定量离子峰面积为纵坐标，农药标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。8.4定性及定量3

5T/CSTEA00052—20228.4.1保留时间被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。8.4.2离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在目标农药。表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度＞50＞20~50＞10~20≤10允许相对偏差±20±25±30±508.4.3定量外标法定量。8.5试样测定将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-串联质谱仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。8.6平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。8.7空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。9结果计算试样中各农药残留量以质量分数ω计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按以下公式计算：�×�����?=×�����式中：ω—试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；ρ—从基质匹配标准工作曲线中得到的试样溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；V—提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；m—试样质量的数值，单位为克（g）；注：计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，含量超1mg/kg时保留三位有效数字。4

6T/CSTEA00052—202210精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值，不得超过算术平均值的10%。11方法定量限本文件毒菌酚、戊硝酚定量限均为0.002mg/kg，消螨酚定量限为0.005mg/kg。5

7T/CSTEA00052—2022附录A（资料性附录）表A.1目标物保留时间、母离子、子离子、去簇电压、碰撞能保留时间母离子子离子去簇电压碰撞能目标物（min）（m/z）（m/z）（V）(V)戊硝酚3.20253.2133.8*/192.8-60-60/-34消螨酚3.29265.5190.0*/218.0-80-48/-40毒菌酚4.13404.9194.9*/196.9-50-36/-36*：定量离子XICof-MRM(22pairs):252.900/133.800amuExpectedRT:3.2ID:戊硝酚-dinosam-1fromSample14(T...Max.5.1e5cps.3.205.0e54.5e54.0e53.5e53.0e52.5e5Intensity,cps2.0e51.5e51.0e55.0e40.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min图A.1戊硝酚（5.0ng/mL）多反应监测（MRM）色谱图6

8T/CSTEA00052—2022XICof-MRM(22pairs):265.500/190.000amuExpectedRT:3.3ID:消螨酚-dinex-1fromSample14(TLF-...Max.3.5e4cps.3.8e43.293.5e43.0e42.5e42.0e4Intensity,cps1.5e41.0e45000.00.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min图A.2消螨酚（5.0ng/mL）多反应监测（MRM）色谱图XICof-MRM(22pairs):404.900/194.900amuExpectedRT:4.1ID:毒菌酚-hexachlorophene-1fromSam...Max.2.6e5cps.4.132.6e52.4e52.2e52.0e51.8e51.6e51.4e51.2e5Intensity,cps1.0e58.0e46.0e44.0e42.0e40.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min图A.3毒菌酚（5.0ng/mL）多反应监测（MRM）色谱图7