高效液相色谱-串联质谱法测定儿童和成人尿液中双酚A、四溴双酚A和辛基酚.pdf

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1、第44卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1期2016年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry19—24DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．150404高效液相色谱-串联质谱法测定儿童和成人尿液中双酚A、四溴双酚A和辛基酚张圣虎张易曦吉贵祥徐怀洲刘济宁石利利(环境保护部南京环境科学研究所，南京210042)。(贵州大学资源与环境工程学院，贵阳550025)摘要采用高效液相色谱一串联质谱法定量检测人体尿液中痕量双酚A、四溴双酚A和辛基酚。将解冻后的尿样酶解，经液

2、液萃取、旋蒸至干，甲醇定容后分析。3种目标物质在0．2～50g／L质量浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0．99，定量限(LOQ)在0．05～0．27g／L之间。在5，10和50L加标水平下，平均回收率为85．7％～118．6％，相对标准偏差RSD(n=3)为4．1％～10．5％。20组儿童与成人的尿样结果表明，尿样中均检出3种目标物，其中，四溴双酚A和辛基酚在儿童及成人尿样中的暴露浓度基本相同，但是双酚A的暴露水平具有显著性差异(儿童>成人)。关键词双酚A；四溴双酚A；辛基酚；高效液相色谱．串联质谱法；儿童；成人；尿液1引

3、言双酚A(BisphenolA，BPA)、四溴双酚A(TetrabromobisphenolA，TBBPA)和辛基酚(4一Tert—octylphe—nol，OP)作为典型环境内分泌干扰物¨已经引起人们的广泛关注。这3种化合物一般可以通过呼吸道和消化道等途径进入体内，流经血液、肝脏和肾脏，经过尿液排出体外l2'5l6J。生物检测结果表明，在人体尿液]、血液，m]、母乳¨]、胆汁，H]、肝脏等生物样品中均含有BPA和OP。毒理研究表明，较低浓度的BPA对小鼠具有雌激素效应l16]，BPA和OP都可以通过调节E2目标基因对小鼠产生内

4、分泌干扰效应173。TBBPA可以干扰哺乳动物正常生殖行为L1，通过与甲状腺激素受体结合产生内分泌干扰效应。目前，水体中BPA、OP和TBBPA含量的分析方法已经比较成熟_20，但是关于人体尿液中3种化合物同时测定的研究鲜有报道。此外，尿液分析中多采用固相萃取法7’I2作为前处理方法，但对于大量样品检测时，存在费用较高、操作步骤较多的缺点。因此，本研究采用液一液萃取的前处理方法，建立了高效液相色谱一串联质谱(HPLC．MS／MS)分析技术，同时检测成人和儿童尿液中BPA，OP和TBB．PA的含量，并对成人和儿童尿液中3种内分泌干

5、扰物的暴露水平作了初步分析评价。2实验部分2．1仪器与试剂AG-285电子天平(瑞士Mettle公司)；数显往复振动摇床(德国IKA公司)；旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)；高效液相色谱一串联质谱仪(LC-AgilentTechnologies1290Infinity，MS—ABSCIEXQTRAP4500，美国)；Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司)；Centrifuge5430R台式高速离心机(德国Eppendorf公司)。双酚A、四溴双酚A和辛基酚(纯度>97％，美国J&K公司)；甲醇(色谱纯，德国Merc

6、k公司)；氨水(色谱纯，国药集团药业股份有限公司)；一葡萄糖苷酸酶(5．OxlO～2．OxlOunits／mgprotein)和硫酸酯酶(Sulfatase≥10000units／gsolid)购自美国SigmaAldrich公司。2．2实验条件2．2．1质谱条件电喷雾离子源(ESI一)；多反应离子监测(MRM)；负离子模式；离子源温度：400~C；2o15-05．18收稿；2015-09—18接受本文系国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(No．2013AA06A308)E-mail：sll@nies．org20分析化

7、学第44卷离子喷雾电压：5500V；气帘气压力：0．207MPa；喷雾气压力：0．241MPa；辅助加热气压力：0．276MPa。其它参数见表1。表1双酚A、四溴双酚A和辛基酚的多反应离子监测Table1MRMParametersofbisphenolA(BPA)，tetrabronobisphenolA(TBBPA)and4-tcrt—octylphenol(OP)2．2．2色谱条件ZORBAXEclipsePlusC18色谱柱(150mm×2．1mm，3．5Ixm)；流动相：0．02％(wv)氨水(A)和乙腈(B)；线性梯度

8、洗脱：0～2min，95％A；3～5rain，80％A；6～8rain，80％～40％A；9～12min，40％一10％A；13～14min，10％～95％A。柱温：40℃；进样体积：5L。2．3样品前处理2．3．1酶解取尿液10mL，置于15mL具塞玻璃管中，