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时间：2022-11-09
《乳鼠心肌细胞的培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1实验材料实验方法操作步骤及人员落实预期结果实验目的意义
2目的：掌握原代细胞培养的一般方法和步骤及培养过程中的无菌操作技术，熟悉原代培养细胞的观察方法。意义：原代培养是指直接从机体取出细胞、组织和器官后立即置于培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。原代培养细胞离体时间短，细胞保持体内原有的基本性质，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞（如动物的胚胎、幼仔的脏器）等更容易进行原代培养。
3仪器：培养箱（调整至37℃）、培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血细胞计数板、离心机、水浴箱（37℃）。试剂：1640培养基（含10%小牛血清）、75%酒精、Hanks液、0.125%胰酶消化液、碘酒、碳酸氢钠液、盐酸液。材料：乳鼠的心脏
4前期准备实验取材消化组织培养细胞
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6用镊子夹住小鼠尾巴将小鼠在酒精中浸泡两次，约2~3秒；用剪刀将小鼠头部剪去；将动物固取材器官范围的被毛，定在解剖板上并将胸部剪开暴露出心脏，用另一个剪刀将小鼠心脏剪下；放入装有预冷的Hanks液的培养皿中，将心脏剪开,剪碎组织至1mm³左右，清洗残留的血液。
7将心肌组织转移至另一个装有预冷的Hanks液的培养皿中进一步剪碎心脏后，加入等体积的0.125％胰酶；将心肌组织转移至离心管中，用吸管反复吹打（使消化下来的细胞彻底从组织团快上掉下来）10min,静置2min后，弃上清；再次加入Hanks液和等体积的0.125％胰酶，常温下用吸管反复吹打10min，静置2min后将上层液转移至100ml容器中，加入含10%小牛血清的1640培养基终止消化；重复上一步骤至组织完全消化，适当控制消化时间。
8加入培养液1~2ml（视细胞量）,血球计数板计数；将细胞调整到5×105个细胞/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中；至置培养箱37℃培养箱培养。24h后换液继续观察培养。
9操作步骤及人员落实
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11预期结果
12谢谢观看！预祝实验圆满成功！PS：部分数据根据实验具体情况修改。
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