DB22T 1613-2012 饲料中三聚氰胺含量的测定液相色谱-质谱质谱法

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1、ICS65.120B04备案号：35744-2013DB22吉本标准仅供内部使用不得翻印林省地方标准DB22/T1613—2012饲料中三聚氰胺含量的测定液相色谱-质谱/质谱法本标准仅供内部使用不得翻印Determinationofmelamineresiduesinfeeds——HPLC-MS/MSmethod2012-12-01发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1613—2012本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-

2、2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、大成集团、嘉吉生化玉米工业有限公司、白城出入境检验检疫局、珲春出入境检验检疫局。本标准主要起草人：胡婷婷、姚天玲、王晓红、张丽、冯博、刘伟艳、张琦、李玲。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1613—2012本标准仅供内部使用不得翻印饲料中三聚氰胺含量的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了饲料中三聚氰胺的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于饲料及饲料原料中三聚氰胺的测

3、定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理试样中残留的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。本标准仅供内部使用不得翻印4试剂与材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1三氯乙酸（C2HCl3O2）：优级纯。4.2乙酸铵（CH3COONH4）：优级纯。4.3乙酸铅（C4

4、H6O4Pb.H2O）。4.4甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.5乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.6氨水（NH4OH）。4.7甲酸（CH2O2）：优级纯。4.81%三氯乙酸溶液：准确称取10g三氯乙酸（4.1）于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。4.930%乙酸铅溶液：称取60g乙酸铅（4.3），用140mL水溶解，混匀。4.105%氨化甲醇溶液：准确量取5mL氨水（4.6）和95mL甲醇，混匀后备用。4.110.1%甲酸的水溶液：准确吸取1mL甲酸（4.7），用水定容至1L，混合后备用。4.1210mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.77

5、2g乙酸铵（4.2），用水溶解并定容至1L，混匀后备用。1DB22/T1613—20124.13标准储备溶液：准确称取三聚氰胺标准物质（CAS号：108-78-1，含量≥99.0%）100mg（精确到0.1mg），用甲醇溶解并定容于100mL棕色容量瓶中，配制成浓度为1000µg/mL的标准储备液。0℃~4℃可本标准仅供内部使用不得翻印避光保存6个月。4.14标准工作液：准确移取一定体积的标准储备溶液（4.13），根据需要用基质液稀释成三聚氰胺浓度为0.5µg/mL、1.0µg/mL、2.0µg/mL、5.0µg/mL、10.0µg/mL、20.0µg

6、/mL和50.0µg/mL的系列标准工作液。该溶液须配制于棕色容量瓶中，4-6℃条件下保存。4.15混合型阳离子交换固相萃取柱（MCX固相萃取柱）：60mg/3mL。使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化。4.16滤膜：0.22µm，有机系。5仪器5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。5.2组织捣碎机。5.3高速离心机：10000r/min。5.4氮吹仪。5.5分析本标准仅供内部使用不得翻印天平：感量为0.01g和0.0001g。5.6超声波清洗器：40kHz。5.7涡旋混合器。6分析步骤6.1提取称取5g（精确到0.01g）粉碎后的

7、试样置于50mL离心管中，加人25mL三氯乙酸溶液（4.8），200μL乙酸铅溶液（4.9），涡旋混合1min，超声提取10min后，10000r/min离心5min，取上清液2.5mL做待净化液。6.2净化将6.1中的待净化液转移至活化后的MCX柱（4.15）中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后用5mL氨化甲醇溶液（4.10）洗脱，整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹至近干，残留物用1mL甲醇定容，过0.22m滤膜后，供LC-MS/MS测定。6.3空白试验除不称取试样外，均按6.1、6.2进行。6.4测定6.

8、4.1色谱参考条件色谱参考条件如下：a)色谱柱：强阳离子交换与反相C18混合填料，混合比例（1