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《重组大肠杆菌bl21 de3 pet28a bgl诱导表达葡聚糖酶的条件优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、第28卷第2期食品与生物技术学报Vol.28No.22009年3月JournalofFoodScienceandBiotechnologyMar.2009文章编号:1673-1689(2009)02-0250-06重组大肠杆菌BL21(DE3)-pET28a(+)-bgl诱导表达B-葡聚糖酶的条件优化*李永仙,郑飞云,李崎,顾国贤(江南大学教育部工业生物技术重点实验室,江苏无锡214122)摘要:研究自行构建的产B-葡聚糖酶的工程菌E.coliBL21(DE3)-pET28a(+)-bgl在LB培养基中的生长特性,考察种子液的菌
2、龄、培养基起始pH、接种量及诱导起始时发酵液菌浓度等对B-葡聚糖酶产生水平的影响;通过正交试验确定诱导剂IPTG及乳糖添加量、诱导温度及诱导剂作用时间。结果表明:培养基起始pH710,对数生长中期的种子液(OD600为0135)以接种量(体积分数)10%接入摇瓶发酵培养,37e,200r/min培养约3h,菌液OD值达到110左右,添加终浓度分别为010336mmol/L的IPTG及10mmol/L乳糖,24e诱导6h,发酵液清液中酶活达到最高(336133U/mL),菌体生长量为1112g/L,发酵液中总酶活达到459132U
3、/mL,是原始菌株在相同条件下所产酶活的6162倍。采用优化培养条件及诱导剂作用条件,重组菌在TB培养基中酶活水平进一步提高,诱导剂作用10h,发酵清液中酶活为1090131U/mL,总酶活1570183U/mL,是原始菌在该条件下酶活的19173倍,显示出重组菌具有广阔的工业化应用前景。关键词:重组大肠杆菌;发酵条件;优化;诱导;B-葡聚糖酶中图分类号:Q939.97文献标识码:AOptimizationofFermentationConditionsofRecombinantE1coliBL21(DE3)-pET28a(+)
4、-bglProducingB-Glucanase*LIYong-xian,ZHENGFe-iyun,LIQi,GUGuo-xian(TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,JiangnanUniversity,Wuxi214122,China)Abstract:Inthismanuscript,theoptimumconditionsforb-glucanaseproductionfromtherecombinantstrainE1coliBL2
5、1(DE3)-Pet28a(+)-bglwerecarefullydetermineandlistsasfollows:10%seedcultures(OD600=0.35)wassupplementedtotheculturemedium(initialpH7.0)andincubatedfor3hwhenthecellconcentrationreachingatOD6001under37eand200r/min.Then010336mMIPTGand10mMlactosewerefedasinductortotheE1co
6、liBL21(DE3)-Pet28a(+)-bglculturebrothandthetemperaturewasshiftedto24eandmaintainedfor6h.thetotalactivityofB-glucanaseachievedat45913U/mL,and33613U/mLB-glucanasewasfoundinsupernatantliquor,washigher6162timesthanthatoftheparentstrain.InTB收稿日期:2008-05-01基金项目:国家863计划项目(2
7、006AA020204)。作者简介:李永仙(1964-),女,四川彭州人,高级工程师,主要从事发酵工程的研究。*通讯作者:李崎(1971-),女,上海人,工学博士,教授,硕士生导师,主要从事啤酒酿造科学与微生物的研究。Email:liqi@jiangnan.edu.cn。第2期李永仙等:重组大肠杆菌BL21(DE3)-pET28a(+)-bgl诱导表达B-葡聚糖酶的条件优化251medium,thevaluescanachieveat19173(109013U/mLinsupernatantand157018U/mLintota
8、l).Theresultspresentedhereindicatedthattherecombinantstrainexhibitedthepotentialapplicationinindustrialproduction.Keywords:recombin
