粗毛栓菌漆酶cdna的pcr扩增 论文正文

《粗毛栓菌漆酶cdna的pcr扩增 论文正文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学院本科生毕业设计（论文）题　　目粗毛栓菌漆酶cDNA的PCR扩增姓　　名学号系别生命科学系专　　业生物工程指导教师职称教授2010年月日学院教务处制12摘要：本实验以半纤维素作碳源培养粗毛栓菌9-12d，收集菌丝体，提取总RNA，做RT-PCR，扩增出两条漆酶cDNA片段。关键词:粗毛栓菌，漆酶cDNA，RT-PCR扩增12Abstract：TotalRNAwasextractedfromTrametesgallicaFr.cailtiatedfor12daysinhemicellulosemedium.RT-PCR

2、wascarriedoutattowcDNAfragmentswereamplified.Keywords:TrametesgallicaFr.,laccasecDNA,RT-PCR指导教师评语：该生认真查阅参考文献，实验方案设计合理，在规定时间内完成了预定任务，初步掌握了从事有关研究的基本实验技能，具备了一定的独立从事科学研究的能力，达到了本科生的培养目标。该文达到了学士学位论文水平。12指导教师签名：年月日论文等级：系负责人（签章）：年月日系审核意见：系公章：年月日填写说明1.用蓝色或黑色墨水的钢笔（或签字笔）填写

3、，书写要清晰、工整、规范，不得打印。2.此表一式两份。一份装入学生档案；一份按此表、开题报告、中期检查表、成绩评定表、论文正文的顺序装订成册，留系存档。12目录引言21实验材料与方法21.1菌株及培养方式21.2使用试剂和仪器31.2.1使用仪器31.2.1所用试剂31.3准备实验31.4总RNA的提取41.5总RNA纯度与浓度的检测41.5.1RNA纯度测定41.5.2RNA浓度测定41.6总RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳41.7RT-PCR反应51.71引物的设计………………………………………………………………51

4、.72RT-PCR反应61.8DNA电泳52结果与分析62.1总RNA提取后的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果62.2RNA浓度及纯度检测72.3逆转录及PCR反应72.4DNA核酸电泳73讨论7参考文献8致谢912粗毛栓漆酶cDNA的PCR扩增摘要本实验主要以粗毛栓菌为材料，收集菌丝体。提取总RNA，做RT-PCR以扩增漆酶cDNA，漆酶DNA得到扩增。关键词粗毛栓菌，漆酶cDNA，RT-PCR扩增PCRAmplificationofLaccasecDNAinTrametesecgallicaAbstractTotalRN

5、AwasextractedfromTrametesgallica.RT-PCRwascarriedoutforamplificationofLaccasecDNAandlaccasewasamplified.KeywordsTrametesgallica,LaccasecDNA,RT-PCR引言漆酶（Laccase，Lac）是一种多酚氧化酶,在结构和功能上与植物抗坏血酸氧化酶、哺乳动物血浆铜蓝蛋白存在着许多相似之处[2]。它是最简单的多铜氧化酶,一般含有4个铜原子,分布于3个高度保守的不同结合位点,每个铜原子在催化机制

6、中都有很重要的作用。漆酶能催化O2通过4个电子还原成水,并且伴随着一些酚类底物的氧化[3]。它最早是从漆树的分泌物中发现的,随后人们发现一些高等真菌也能分泌这种酶。现在人们知道,漆酶广泛存在于担子菌、半知菌和子囊菌中,但其中最主要的生产者是担子菌中的白腐菌[4]，粗毛栓菌（Trametesgallica）是一种白腐担子菌，在我国分布广泛，是杨木的一种主要生物降解者。已有研究表明，该菌产漆酶能力较高[5]。漆酶早期的研究主要集中在体内功能的研究，随着20世纪70年代前后聚丙烯酰胺凝胶电泳和分子克隆等生物学技术的问世,漆酶

7、的研究也揭开了新的一页。在国外很多菌种的漆酶基因得到了克隆并且进行了分析和鉴定,一些漆酶基因也实现了其异源表达[6]。漆酶在木质素降解、微生物菌体形态形成等方面具有重要功能[6]，普通微生物产漆酶的量及纯度不足以大规模的工业应用。要工业化生产漆酶，可通过把可高效产漆酶的基因与载体重组，然后导入受体细胞，形成稳定转化子，大批量培养，使漆酶进行异源表达。因此必须进行漆酶基因的测序，了解基因组成及酶切位点等，以便DNA重组时选择合适的限制性内切酶进行有效切割。所以漆酶的模板cDNA提取及大量扩增成为首要工作。传统的模板DNA

8、提取方法12是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组分，溶解细胞膜，使蛋白质变性，再用蛋白酶K来消化去除蛋白质，尤其是与DNA结合的蛋白质，再用酚-氯仿抽提，然后用乙醇沉淀核酸，供PCR实验用[7]。本实验主要是扩增有效表达漆酶的cDNA片段，因此利用逆转录的方法制备了模板cDNA，并对其进行PCR扩增，此法去除了内含子的干扰，能满足特