[生物工程精品] 粗毛栓菌漆酶酶谱的分析

《[生物工程精品] 粗毛栓菌漆酶酶谱的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、XXX本科生毕业设计（论文）题　　目粗毛栓菌漆酶酶谱的分析姓　　名XXX学号XXX系别生命科学系专　　业生物工程指导教师XXX职称教授2010年月日XXX教务处制目录摘要…………………………………………………………………………………1关键词…………………………………………………………………………………1Abstract…………………………………………………………………………1Keywords………………………………………………………………………1引言…………………………………………………………………

2、……………11材料…………………………………………………………………………11.1菌种………………………………………………………………………11.2PDA培养基………………………………………………………………12方法…………………………………………………………………………12.1粗酶的制作………………………………………………………………………12.2等电聚焦酶谱分析……………………………………………………………12.2.1仪器………………………………………………………………………22.2.2试剂……

3、……………………………………………………………………22.2.3溶液配制……………………………………………………………………22.2.4装管……………………………………………………………………22.2.5装槽………………………………………………………………………22.2.6电泳…………………………………………………………………………22.2.7剥胶…………………………………………………………………………22.2.8拍照………………………………………………………………………23.结果与讨论………………

4、………………………………………………………2参考文献……………………………………………………………………………3致谢…………………………………………………………………………………3粗毛栓菌漆酶的酶谱分析生物工程专业学生XXX指导教师XXX摘要对粗毛栓菌粗酶液进行的等电聚焦显示至少存在4种漆酶的同工酶。关键词粗毛栓菌，漆酶，等电聚焦，酶谱ZymographyoflaccasesinTrametesgallicaFr.Abstract：Theresultshowedthatatleastfourlacc

5、seisoenzymesfromTrametesgallicaFr.wasabservedontheisoelectricfocusingzymogram.Keywords：Trametesgallica,laccase,isoelectricfocusing，Zymogram引言漆酶是一种含铜的多酚氧化酶[1]，最早是从日本的漆树汁中发现的，是人类最早发现的酶之一，但直到现在，人们对它的认识还不完整[2]。近年来，随着漆酶功能的逐步发现，有关漆酶的研究受到普遍的重视。由于在降解木质素方面的功能，使

6、之在制浆造纸工业，特别是纸浆生物漂白领域得到深入的研究和开发[3,4]，在环保方面也有很大的潜力[5]，如漆酶可与有毒的酚类作用，使含苯氧基类的除草剂、石油化工废物的物质解去毒性等[6]。随着应用的不断加深，漆酶的研究和开发越来越受到人们的关注[7]。本文仅就粗毛栓菌漆酶进行等电聚焦初步分析。1材料1．1菌种菌种是由XXXXXX博士提供。经鉴定为粗毛栓菌TrametesgallicaFr.1.2PDA培养基称取去皮马铃薯200g/L，加适量水煮沸20min，用纱布过滤得滤液，加入葡萄糖20g，琼脂粉

7、15g，补足水至1,000mL，混匀，融化，分装，121℃灭菌20min。此培养基主要用于粗毛栓菌的保存。2方法2.1粗酶液的制备菌种经麦草培养基培养30天后，将培养物取出，加去离子水，浸泡4h，然后用六层纱布过滤，取上清液。2.2等电聚焦酶谱分析2.2.1仪器DYY-8C型电泳仪（北京六一仪器厂）、圆盘电泳槽DYCZ-27B、电子天平、移液枪。2.2.2试剂丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、两性电解质Ampholine、过硫酸铵、TEMED、H2SO4、NaOH、琼脂糖、愈创木酚。2.2.3聚丙烯酰胺凝胶

8、溶液配制1、丙烯酰胺贮液29克丙烯酰胺和1克甲叉双丙烯酰胺溶于水，定溶至100mL，滤去不容物后存于棕色瓶。2、聚丙烯酰胺凝胶配方（胶终浓度7.5%）取4.4mL丙烯酰胺贮液，加入1.1mLAmpholine（40%，pH3-10），12mLdH2O，17.6uLTEMED（10%），17.6uL过硫酸铵（10%），粗酶液80uL。2.2.4装管先用0.7%的琼脂糖凝胶（使用电极液0.4MNaOH溶液配制）将洁净的玻璃管封底约0.5厘米，将配好的丙烯酰胺（含两性载体）