GB15193.9-2014食品安全国家标准啮齿类动物显性致死试验.pdf

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1、中华人民共和国国家标准犌犅１５１９３．９—２０１４食品安全国家标准啮齿类动物显性致死试验２０１４１２２４发布２０１５０５０１实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会犌犅１５１９３．９—２０１４前言本标准代替ＧＢ１５１９３．９—２００３《显性致死试验》。本标准与ＧＢ１５１９３．９—２００３相比，主要变化如下：———标准名称修改为“食品安全国家标准啮齿类动物显性致死试验”；———增加了术语和定义；———修改了试验目的和原理；———修改了试验方法；———修改了数据处理；———增加了试验报告

2、；———增加了试验的解释。Ⅰ犌犅１５１９３．９—２０１４食品安全国家标准啮齿类动物显性致死试验１范围本标准规定了啮齿类动物显性致死试验的基本试验方法和技术要求。本标准适用于评价受试物的致突变作用。２术语和定义２．１显性致死突变发生于生殖细胞的一种染色体畸变，这种遗传上的结构或数目改变并不引起生殖细胞（精子或卵子）的机能障碍，而是直接造成受精卵或发育期胚胎的死亡。３试验目的和原理显性致死试验是检测受试物诱发哺乳动物生殖细胞遗传毒性的试验方法，其观察终点为显性致死突变。致突变物可引起哺乳动物生殖细胞染

3、色体畸变，以致不能与异性生殖细胞结合或导致受精卵在着床前死亡，或导致胚胎早期死亡。一般以受试物处理雄性啮齿类动物，然后与雌性动物交配，按照顺次的周期对不同发育阶段的生殖细胞进行检测，经过适当时间后，处死雌性动物检查子宫内容物，确定着床数、活胚胎数和死亡胚胎数。如果处理组死亡胚胎数增加或活胚胎数减少，与对照组比较有统计学意义，并呈剂量反应关系或试验结果能够重复者，则可认为该受试物为哺乳动物生殖细胞的致突变物。４试验方法４．１受试物４．１．１受试物的配制：受试物应溶解或悬浮于合适的溶媒中，溶媒应为无

4、毒物质，不与受试物发生化学反应。首选溶媒为水，脂溶性的受试物可使用食用植物油（如橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液，不能配制成混悬液时，还可配制成如糊状物的其他形式。一般情况下受试物应现用现配，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。４．１．２给予途径：应采用灌胃法，或用喂饲法，小鼠常用灌胃体积为１０ｍＬ／ｋｇ体重～２０ｍＬ／ｋｇ体重，大鼠常用灌胃体积为１０ｍＬ／ｋｇ体重。阳性对照物也可采用腹腔注射的方法，注射体积为１０ｍＬ／ｋｇ体重～２０ｍＬ／ｋｇ体重。

5、４．１．３给予受试物的方式：一般采用每天１次、连续５ｄ的给予方式。如果认为其他方式合理的也可采用，如一次性或连续３个月给予受试物。４．２实验动物４．２．１动物品系与级别：动物品系应选择显性致死本底值低、受孕率高且着床数多、经生殖能力预试受孕率在７０％以上者，推荐使用小鼠或大鼠。实验动物应符合ＧＢ１４９２２．１和ＧＢ１４９２２．２的有关规定且有质量１犌犅１５１９３．９—２０１４合格证，健康的雄性成年小鼠（性成熟，６周龄～８周龄，或体重３０ｇ以上），或大鼠（性成熟，８周龄～１０周龄，或体重２００ｇ以上

6、）。交配用的成年雌鼠，应该是未曾有过交配和生育史者，不同交配周期的雌鼠周龄、体重应相近似。４．２．２动物数量：应使用适当数目的雄性动物，雄鼠的数目应足以使每个交配周期每组产生３０只～５０只受孕雌鼠。每组雄鼠应不少于１５只。４．２．３动物饲养：实验动物饲养条件应符合ＧＢ１４９２５、饮用水应符合ＧＢ５７４９、饲料应符合ＧＢ１４９２４的有关规定。４．３剂量试验至少设３个受试物剂量组，高剂量组应能引起动物出现某些毒性体征，如生育力轻度下降，高剂量组受试物剂量可在１／１０ＬＤ５０～１／３ＬＤ５０之间。急性毒

7、性试验给予受试物最大耐受剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）求不出ＬＤ５０时，则以１０ｇ／ｋｇ体重、或人体可能摄入量的１００倍、或受试物最大给予剂量为最高剂量，然后在此剂量下再设２个剂量组。一般应同时做阳性和阴性（溶媒）对照组，如果同一实验室最近１２个月内阳性对照组巳获得阳性结果，且实验室环境条件和动物品系没有变化，则可不再设阳性对照组。阳性对照物常选用环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ），３０ｍｇ／ｋｇ体重～４０ｍｇ／ｋｇ体重，腹腔注射，每天１次，连续５ｄ；其他还可选用三亚乙基密胺（ｔｒｉ

8、ｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）、甲基磺酸乙酯（ｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、甲基磺酸甲酯（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ）等。４．４试验步骤和观察指标４．４．１交配：给予雄鼠受试物后次日（一次染毒法），或末次给予雄鼠受试物后次日（多次染毒法），雄鼠与雌鼠按１∶１或１∶２比例同笼交配５ｄ后，或根据阴道精子、阴栓检查确定交配成功后，取出雌鼠另行饲养。间隔２ｄ后，雄鼠以同样比例再与另一批雌鼠同笼交配，小鼠如此进行５批～６批，大鼠８批～１０批。４．４．２胚