[生物工程精品] 粗毛栓菌漆酶的分离与纯化 [答辩相关表格]

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1、XXX本科毕业设计(论文)答辩表论文题目：粗毛栓菌漆酶的分离与纯化生命科学系系生物科学专业06级本科二班学号XXX姓名XXX指导教师XXX评阅成绩答辩委员会主席答辩委员会委员答辩成绩XXX教务处印制2010年6月2日XXX本科毕业设计（论文）答辩记录表答辩时间：2010年6月2日记录人签字：问1：如何计算得到漆酶的纯化度和回收率？答：一个典型的酶纯化过程常包括多个单元操作，各单元操作如何串联，需靠实践探索，每经过一个步骤，一般可提高酶纯度2-3倍，总纯度可提高数千倍，而回收率常仅百分之几或十几。该实验中：回收

2、率=U1/U2（U1:层析前总酶活力；U2:层析后收集酶的总酶活力），纯化度=N1/N2(N1：层析前的比活力；N2：层析后的比活力）。问2：你在盐析沉淀含漆酶的原酶时所用硫酸铵的饱和度是多少？答：用75%硫酸铵饱和度对酶液进行盐析。确定该浓度需要设置10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%的饱和度梯度分别对浸提的酶液盐析，并测定上清液中漆酶酶活，发现75%饱和度时，盐析得到的沉淀中漆酶活性最高。所以要用75%的硫酸铵饱和度对漆酶进行盐析沉淀。问3：裝柱的注意事项有哪些？

3、答：本次漆酶的分离与纯化试验使用的是阴离子交换剂Q-SepharoseFast-Flow。层析柱填装时要先关闭出口，用溶剂灌到1/3体积，防止气泡产生，而且为避免分层，最好一次装完；裝柱完毕后要在柱上部添加少量溶剂，防止层析介质表层暴露到空气中；上样前层析介质要用溶剂平衡。论文答辩评语：该生介绍了论文的主要目的、内容与结果，能够正确回答有关提问。该生具备了一定的独立从事科学研究的能力。该论文达到了学士学位论文的要求。答辩委员会主席签名：XXX本科生毕业设计开题报告毕业论文题目粗毛栓菌漆酶的分离与纯化题目类型实

4、验题目来源指导教师拟定院（系）生命科学系专业生物科学指导教师XXX职称教授姓名XXX年级06级学号XXX一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)漆酶（Laccase,EC1.10.3.2）是一种含铜离子的多酚氧化酶，最早发现于日本紫胶漆树Rhusvernicifera的浸出液中，现已证实一些高等真菌(主要是白腐真菌)也能分泌漆酶。白腐真菌是生物圈中木质素、纤维素和半纤维素的重要降解者，其分泌的漆酶在木质素降解过程中起着重要作用。漆酶可与多种底物作用，在有机合成、生物检测、免疫检测、有毒化合物的消除

5、、生物传感器制作、制浆造纸废水处理、纸浆生物漂白和饮料加工、食用菌生产、食品分子交联、植物食品保护等方面具有广阔的应用前景和潜在应用价值。多年来，已对漆酶及其产生菌进行了广泛研究，内容涉及菌株生长特性、漆酶的合成调控、酶的分离纯化和酶学性质等多个方面。现已有近百种不同来源的漆酶被分离纯化并进行了酶学性质研究，一些漆酶基因已被克隆测序，有的还在酵母等真核生物内实现异源表达，但选育新的漆酶产生菌，优化其产酶条件仍是提高漆酶产量的一条重要途径和今后一段时期内研究的热点。本研究所用粗毛栓菌Trametesgallic

6、a是一种能够分泌漆酶的白腐真菌，可降解麦草木质纤维素。本文就以漆酶的分离、纯化及其部分性质进行初步研究。二、研究的主要内容及预期目标1、本文主要测定了粗毛栓菌在一种以麦草粉为诱导物的培养液中的产漆酶情况，并对酶的一些基本性质进行了研究，以便为其在生产中的应用提供理论依据。2、对粗毛栓菌产漆酶的诱导、酶的分离纯化及其部分性质进行初步研究。3、对粗毛栓菌漆酶进行纯化,并对性质进行探讨,以便为木质素的降解的研究提供一定的科学依据,同时为在造纸工业和环保工业上的应用提供一定的理论依据。三、研究方案（思路）1、产酶培养

7、基的制备及菌种培养。2、浸提漆酶。3、对提取的粗酶进行超滤浓缩得粗酶液。4、对粗酶液盐析，并离心。5、透析：除去盐离子。6、离子交换柱层析：收集合并有酶活力的部分。7、测定收集的酶的活力，回收率与纯化度并探讨该酶的其他一些性质。四、论文进度安排1、3月27日，产酶培养基的制备。2、4月1日-4月26日，菌种的培养。3、4月28日，粗酶液的浸提。4、4月30日，超滤浓缩。5、5月3日，盐析。6、5月5日，离心并透析，酶活力和蛋白含量的测定。7、5月8日，酶液浓缩并进行离子交换柱层析。8、5月13日，纯化度和回收

8、率的测定。五、主要参考文献［1］ClausH.2004.Laccases：Structure，reactions，distribution．Micron.35:93-96.［2］ChistropherF．Thurstor．1994.TheStrutureandFunctionofFungalLaccase【J】，Microbiology,140；19-26．［3］BourbonnaisR,Paice