[生物工程精品] 粗毛栓菌mnp的分离与纯化 [答辩相关表格]

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1、XXX本科毕业设计(论文)答辩表论文题目：粗毛栓菌MnP的分离与纯化生命科学系生物科学专业06级本科一班学号XXX姓名XXX指导教师XXX评阅成绩答辩委员会主席答辩委员会委员答辩成绩XXX教务处印制2010年6月2日XXX本科毕业设计（论文）答辩记录表答辩时间：2010年6月2日记录人签字：问1：什么是Q-SepharoseFastFlow?答：意思是快流速Q琼脂糖凝胶。是一种强阴离子交换凝胶,它与待分离样品中在上样缓冲液所游离出来的阴离子进行交换，与阳离子不能交换。然后结合上的阴离子依据结合能力的大小被洗脱液依次洗脱下来，从而将不同的物质分离开。其颗粒大小：90μm；最高流速：75

2、0cm/h;下游初步纯化介质，高流速加上高载量，可快速纯化大量粗产品。储存条件：4-28℃。问2：如何提高MnP的产量？答：MnP是一种比较娇贵的酶，对环境要求苛刻，低的酸碱耐受性，温度和pH值对酶的活性影响较大。可以从以下方面提高其产量（1）控制适宜的碳氮比（2）改变培养条件比如静置培养或震荡培养（3）控制适宜的温度{最适温度}，低温不利于菌株生长产酶，随着温度的提高，菌株的产酶量大幅度提高，但是当温度达到一定值时，菌体的生长最旺盛，菌株的产酶活力大幅度增加。（4）控制培养基的pH值{最适pH}（4）培育高产菌株{诱变育种}。论文答辩评语：该生介绍了论文的主要目的、内容与结果，能够

3、正确回答有关提问。该生具备了一定的独立从事科学研究的能力。该论文达到了学士学位论文的水平。答辩委员会主席签名：XXX本科生毕业设计（论文）开题报告毕业设计（论文）题目粗毛栓菌MnP的分离与纯化题目类型实验题目来源XXX教授拟定系生命科学系专业生物科学指导教师XXX职称教授姓名XXX年级06级学号XXX一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)木质纤维素主要由纤维素、半纤维素和木质素组成,是自然界中广泛存在的可再生的数量巨大的生物质资源。木质素是由苯丙烷衍生物单体构成的一种结构复杂的立体网状物质，是第2大类天然聚合物,在数量上仅次于纤维素。由于木质素立体结构的复杂性,所以绝大

4、多数微生物不易对其进行生物学降解。木质素的微生物降解作用是维持自然界生物碳素循环的重要组成部分。降解木质素的微生物主要是一些可分泌胞外过氧化物酶的白腐真菌,这些酶参与对木质素大分子聚合物的最初裂解反应。木质素生物降解的酶系主要包括木质素过氧化物酶，锰过氧化物酶(manganeseperoxidase,MnP)和漆酶（laccase）,这些酶可在木质素聚合物内形成自由基,导致键的不稳定从而打断木质素大分子。在许多真菌中,MnP是木质素起始降解的关键酶,因为MnP可产生强氧化态的Mn3+,Mn3+作为可扩散的氧化还原介质裂解木质素聚合物中的芳香环部分,然后在其它酶的协同作用下,最终导致大

5、分子的断裂。锰过氧化物酶（MnP）的底物专一性弱，可氧化各类芳香化合物，所以具有极高的工业应用潜力，如生物制浆、纸浆的酶法漂白、有机污染物的降解和环境的生物修复等。在环境保护中，工业“三废”、化学农药分解时往往产生毒性物质，MnP能将其逐步降解为二氧化碳。在造纸工业中，MnP在纸浆的生物漂白方面有很大的应用前景。在褐煤的生物降解中，微生物对低阶煤具有脱硫、液化等能力，可减少能源的浪费和环境的污染，成为研究的热点。由于MnP底物的多样性及酶本身结构、基因编码、调控表达的复杂性,国内的研究尚处于初期阶段;国外的研究虽然取得一定进展,但对于MnP的分子生物学、高效表达体系的构建等研究尚有待

6、深入。本实验是在对粗毛栓菌（Trametesgallica）进行麦草粉固态培养近60天，对MnP进行分离纯化，以便为将来有效地克隆编码这些酶类的基因，建立高效表达体系奠定必要的工作基础。二、研究的主要内容及预期目标主要研究内容：本课题主要是在对粗毛栓菌锰过氧化物酶的分布、来源、结构、性质及其功能等各方面有了深入了解的基础上，通过麦草粉固态培养，对MnP进行分离纯化。三、研究方案（思路）粗酶液的制备→盐析→透析→Q-SepharoseFastFlow阴离子交换层析四、论文进度安排(1)2010年3月20-3月27日查阅文献资料，准备实验用仪器与试剂(1)2010年4月15日粗酶液的制备

7、(2)2010年4月20-24日盐析、透析(3)2010年4月25-30日Q-SepharoseFastFlow阴离子交换层析(4)2010年5月18日进一步查阅文献资料，并开始论文的写作工作(5)2010年6月2日论文答辩五、主要参考文献[1]GlennJK,GoldMH.PurificationandcharacterizationofanextracellularMn(Ⅱ)-dependentperoxidasefromthelignin-degra