不同破壁方法对大肠杆菌dna提取的影响[1]

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1、不同破壁方法对大肠杆菌DNA提取的影响[1]不同破壁方法对大肠杆菌DNA提取的影响[1].txt——某天你一定会感谢那个遗弃你的人，感谢那个你曾深爱着却置之你不顾的人。做一个没心没肺的人,比什么都强。________舍不得又怎样到最后还不是说散就散。..[收稿日期]..2009..12..14;2010..03..27修回..[作者简介]..丁小云(1983-),女,在读硕士,研究方向:植物营养学。E..mail:dingxiaoyun654321@126.com..*通讯作者:魏成熙(1950-),男

2、,教授,硕士生导师,从事土壤肥力与作物生产方面的教学及研究工作。[文章编号]1001..3601(2010)04..0242..0149..02不同破壁方法对大肠杆菌DNA提取的影响丁小云1,耿俊丽2,魏成熙1*(1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.福建师范大学生命科学学院,福建福州350000)....[摘..要]为了解不同细胞破壁方法对大肠杆菌总DNA提取效果的影响,分别采用CTAB/溶菌酶/蛋白酶K法、溶菌酶/SDS法、CTAB/SDS法对大肠杆菌进行破壁提取DNA,比较了3种方法从大肠

3、杆菌中提取DNA的效果。结果表明:3种方法都可以从大肠杆菌中提取到分子量大于21.2kb的DNA片段,1mL菌液DNA的提取量为14.3~43.6..g,不同方法间在DNA产量及纯度等方面存在较大差异。[关键词]大肠杆菌;DNA;提取方法[中图分类号]S852.61+2[文献标识码]AEffectofDifferentExtractmethodsonDNAExtractAmountfromEscherichiacoliDINGXiao..yun1,GENGJun..li2,WEICheng..xi1*(

4、1.CollegeofAgriculture,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025;2.CollegeofLifeSciences,FujianNormalUniversity,Fuzhou,Fujian350000,China)....Abstract:ThreedifferentDNAextractingmethodsofCTAB/lysozyme/proteinaseKlysis,SDS/lysozymelysisandCTAB/SDSlysiswereu

5、sedinextractingDNAfromEscherichiacolitostudytheeffectonDNAextractamountfromEscherichiacoli.TheresultsshowedthateachofthreetestedmethodscouldextractDNAfragmentofabove21.2kbmolecularweightfromEscherichiacoli,14.3~43.6..gDNAcouldbeextractedfrom1mLEscherichi

6、acolisolution,andtherewasobviouslydifferenceinDNAextractamountandpurityamongthreeextractmethods.Keywords:Escherichiacoli;DNA;extractionmethod....大肠埃希氏杆菌是肠道的正常菌群,广泛存在于土壤、空气、河流和海洋等自然界,利用其基因组DNA通过相应的PCR和电泳等技术建立基因..指纹库,实现粪便污染源示踪,已成为生物示踪中的一种有效的方法[1]。作为分子生物学研究

7、的第一步,样品DNA的提取尤为重要。提取DNA的总量、成分、纯度、片段大小以及提取方法的偏倚性[2]将对后续工作产生影响。常用的破壁方式主要有物理法、化学法、酶解法和联合裂解法,经过人们长期的研究和总结,联合裂解法较单独使用某一种方法破壁提取DNA的效果好。为寻找一种简便有效的大肠杆菌DNA的提取方法,研究了3种DNA的提取方法对大肠杆菌总DNA的提取效果,筛选适合于大肠杆菌DNA的提取方法,为进一步开展分子生物学方向的研究提供科学依据。1材料与方法1.1材料1.1.1试剂Tris(三羟甲基氨基甲烷)、

8、EDTA(乙二胺四乙酸)、CTAB(十六烷基三甲基溴化胺,分析纯),购自中国医学(集团)上海化学试剂公司;M..琼脂糖Promega分装;溶菌酶Fluka进口分装;蛋白酶K(aMRESCO);....DNAMarker(EcoR!/Hind.),DL2000..DNAMarker,均购于华美生物工程有限公司。1.1.2PCR引物PCR引物,购自宝生物工程(大连)有限公司。1.1.3大肠杆菌大肠杆菌,南阳师范学院细胞实验室提供。1.2方法1.