MMFSCNJ出口肉及肉制品中林可霉素残留量检验方法.docx

《MMFSCNJ出口肉及肉制品中林可霉素残留量检验方法.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、MM_FS_CNJ_01出口肉肉制品林可霉素残留量纸色谱法MM_FS_CNJ_0107出口肉及肉制品中林可霉素残留量检验方法1.适用范围本方法适用于出口猪肉中林可霉素残留量的检验。2.原理概要试样中林可霉素残留用缓冲溶液提取。提取液经离心后取上清液与藤黄微球菌作用，根据产生抑菌圈的大小用标准曲线法定量。必要时，用纸色谱法进行确证。3.主要试剂和仪器.主要试剂林可霉素标准品：已知纯度》%由卫生部药品生物制品检定所提供，或等效品；磷酸盐缓冲液：称取无水磷酸氢二钾及无水磷酸二氢钾，溶于水中并定容至1000mL；试验菌种：藤黄微球菌（

2、Micrococcusluteus），由卫生部药品生物制品检定所提供，菌号CMCC2800；1林可霉素标准贮备液：称取一定量林可霉素标准品（精确至，用磷酸盐缓冲液溶解并稀释，配成浓度为100卩g/mL的林可霉素标准贮备液，保存于4°C冰箱中（不宜超过一个月）；林可霉素标准工作液：取上述贮备液用磷酸盐缓冲液稀释，分别配制成浓度为，，，，卩g/mL的标准工作液，作为绘制标准曲线用。需当天配制，当天使用；培养基1（附录A中A1）；培养基2（附录A中A2）;培养基3（附录A中A3）;生理盐水：称取氯化钠，溶解于1000mL水中，于12

3、1C，高压灭菌15min。展开剂：磷酸盐缓冲液-甲醇（1＋1）。.仪器培养皿：内径90mm底部平整、光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦盖；牛津杯：不锈钢圆筒，外径土mm内径土mm高（10±mm克氏瓶：800mL；游标卡尺：测量范围0〜200mm精度或抑菌圈测量仪；绞碎机：电动；均质器：10000r/min，带均质杯（300mL）；离心机：8000r/min；水浴锅：恒温±1C；恒温培养箱：（30±1）C,搁板应保持水平；高压灭菌器；长方形培养皿：x8cmx23cm；色谱缸：20cmx15cmx30cm；色谱纸：6cmx20cm滤纸；

4、微量注射器：10卩L或50卩L。4.试样的抽取与制备.检验批以不超过2500件为一检验批。同一检验批的产品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。.抽样数量批量，件最低抽样数，件1〜25126〜1005101〜25010251〜50015501〜1000171001〜250020.抽样方法按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋小包装重量超过2kg者，可用灭菌刀具从包件中割取不少于100g,作为原始样品。原始样品总量不少于2kg。混合后，置于清洁容器内，加封

5、并标明标记，及时送交实验室。.试样制备从混合原始样品中取出部分代表性样品，将可食部分放入绞碎机内绞碎，充分混匀，用四分法缩分成不少于500g，作为试样。装入清洁容器内，加封后标明标记。.试样保存将试样于—18C以下冷冻保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。1.过程简述.样液制备称取30g试样(精确至于均质杯内，加入5mL磷酸盐缓冲液，以8000r/min均质2min，转入离心管中，以8000r/min离心10min。按上述各步骤再重复两次，合并三次上清液。用1mol/L氢氧化钠溶液将其

6、调至，以磷酸盐缓冲液定容至20mL再离心，取上清液作为样液。.菌悬液的制备将菌种接种于培养基1中，混匀，置(30±1)C培养(24±2)h。再转种到培养基2斜面上，置(30±1)C培养16〜18h后，加入3mL培养基1,洗下菌苔。吸取1mL此溶液转移至克氏瓶中培养基2的表面，置(30±1)C培养(24±2)h。用15mL生理盐水洗下琼脂表面上的菌苔，制成菌悬液，置4C冰箱保存(可保存2周)。.菌悬液最佳用量测定测试前应先用卩g/mL林可霉素标准工作液对上述菌悬液的用量进行预测试。以不同量的菌悬液加入经熔化并冷却至45〜50C的

7、培养基3中，经充分混合并经(30±1)C培养(18±1)h后，选择能使该标准工作液产生直径为(土10%)清晰、完整的抑菌圈的菌悬液，加入量为菌悬液的最佳用量。.检定平板的制备将培养基3熔化，冷却至40〜45C,加入最佳用量(从中求得)菌悬液使其充分混合后，取注入灭菌培养皿中，保持水平，待凝固制成检定平板。所用平板需当天制备。.标准曲线的制备以卩g/mL浓度的标准工作液作为参考浓度。标准曲线上的每个标准工作液浓度各取3个检定平板为一组。在每个平板的表而放置6个牛津杯，使牛津杯在半径为的圆面上成60°角间距。其中3个牛津杯内加满参

8、考浓度溶液，另3个牛津杯内加满其他一种浓度的标准工作液。参考浓度溶液与标准工作液要间隔放置。5种浓度的标准工作液共用15个检定平板。含量最低的标准工作液卩g/mL）的3个检定平板作为判断阴性结果的对照，其他12个检定平板用来绘制标准曲线。这样，卩g/mL参考浓度溶液将得出45