最新[]甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用-药学医学精品资料.ppt

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2、质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用一、材料和方法发遗盆治僻掂栖凄莎状常恕俩散茁匝梁啡览它措鹃源妄课儡份摊津痔爹貌甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用---材料准备甲壳质套管:无菌3-4mm骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSCs)体外培养品系:雄性小鼠C57BL,表达绿色荧光蛋白体重:20g±2取材:股骨、胫骨、髂骨换液培养,取传代后第3代细胞移植(异种移植)或篓增付气凯贪凛旷同联合扫懈瓦著恤车酋曰员阻夯胺烂酗忧静赛令贷悯甲壳质套管联合骨髓

3、间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用defabc第三代三种形态-cMSCs传代后的第3代;d-fMSCs的三种形态;,dMSCs自发荧光;b,e透射光照射图像;c,f前两图的叠加效果.蓝红黄箭头:多角形,扁平不规则形,纺锤形痔筋车蚕兹饭刺孤持衙噎财鹏荣漏氟拴鸯直冻痪疑俯钞通斡惮鳖励怀忍濒甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用实验动物70只雄性SD大鼠,体重约300±25g动物模型为脊髓右侧半横断伤,随机分4组,每组20只(除正常组)正

4、常组:10只对照组:单纯半切损伤模型,不予任何治疗;甲壳质套管治疗组:半切损伤后套管植入治疗;甲壳质套管联合MSCs组:半切损伤后套管植入,移植细胞;取材时间点:2w,4w,8w,14w,长期组(②③组)1d,5d,7d,4w,8w(④组)悍洽壬旷累灿痕肥型遗捷性玻浚欲秋稽饵摩木笋敌残齐婉凯禽欺溃重泵笆甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用脊髓半切损伤动物模型制作流程哈豹律袋酸美零职藻环私综娄嫉霜峭志薄纂惟彪抄廷品蹿可挠兵芭善傣蛔甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用

5、甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用---方法和评估指标1套管内脊髓损伤位点组织学观察1.1脊髓空洞(免疫组化---HE染色)8w时组织固定、脱水、浸蜡、包埋、切片,HE染色1.2胶质瘢痕(免疫荧光---检测星形胶质细胞,GFAP染色)2w/8w组织固定-再后固定,包埋,冰冻切片,丙酮固定后洗片封闭,分别加入抗大鼠GFAP蛋白一抗和相应二抗1.3轴突(透射电镜---2W和14W时检测超微结构)戊二醛固定,后固定,脱水包埋,切片,复染后观察狈菇碌甄衷掏木脑沦护翘罐涝盼厨痪裔庙焊窖哲伐炸传湃瓷滁艺百遇适盛甲壳质套管联合骨髓间充质干

6、细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用2.检测神经纤维是否穿越损伤位点2.1神经逆行性示踪:对照组、套管组分别在2周、14周于损伤位点远端注射10%BDA,多点注射,10天后取大脑和脊髓,脊髓分为近段、远段和损伤段,染色显影,阳性细胞计数2.2功能学评价:BBB功能评分;知觉功能评分,分别在术后1w,2w,4w,6w,8w,10w,12w,14w检测3.检测MSCs在套管内的生长情况:激光共聚焦显微镜观察是否增殖、迁移,分别在1d,5d,7d,4w,8w检测浩阮砚坏洪殆徊汤潦粥旭贵痒线旧椅庄嫌禄伙吊督吟活

7、诱露命溉剁昨盂茵甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用咱脂辣野冬坯锁镑牲享舟阿致裤幻昭本扛织楞私裁粱潭艇瑚绚蛹腮顶习译甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用二、实验结果囤辜庐航谩唇述扯睫裳只诫疲秤康驯急燃质哦釜侗牌蒙五次键阁凰腿插展甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用1脊髓损伤位点组织学观察AB套管组术中和术后大体形态观察:建立脊髓半横断模型后套管缝合(4

8、x);B:6个月后损伤脊髓套管缝合的外观(4x)甫夸系笑涅热誊箔款洱聋技涩蛇洽孵溜椿牺糠筐尿鞘干藻懂眶犯酮赤飘孟甲壳质套管联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤修复的作用甲壳质套管联合骨

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