最新小鼠骨髓间充质干细胞原代培养-药学医学精品资料.ppt

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1、最新小鼠骨髓间充质干细胞原代培养-药学医学精品资料一、立题依据有利于进行骨髓间充质干细胞的生物学特性的研究为下一步的传代培养创造条件可以直接应用于临床实践，是研究骨髓间充质干细胞作用的前提1、小鼠骨髓间充质干细胞原代培养的意义2、仪器倒置显微镜尼康TE2000E（上海于欣仪器有限公司）CO2恒温培养箱MC0-15A(日本三洋电机楳氏会公司)超净工作台SW-CJ-2F（苏州安泰空气技术公司）生物显微镜（舜宇公司）低温高速离心机（Jouan公司)无菌操作台，血球计数板，6孔培养板等3、方法骨髓的收集Percoll密度梯度离心法分离纯化骨髓间充质干细胞贴壁培养骨髓间充质干细胞形态学

2、观察原代培养细胞生长曲线的测定（一）骨髓间充质干细胞的形态学观察24h后就见有细胞贴壁，多数细胞呈圆形（图1A）72h后首次半量换液去除未贴壁细胞，此时贴壁的细胞为单个，形态大部分为圆形（图1B)三、结果结果一第1次换液后5～7d可见由几十个到数百个细胞组成的集落，细胞形梭态呈形、三角形或星形（图1C、D）结果一原代细胞培养10d左右，细胞快速增殖，每个集落中的细胞不断增殖呈长梭形放射状排列（图1E）培养2周左右，每个小集落形成约数百致上千个细胞的大集落，集落交界处出现重叠、融合（图1F)图1.倒置显微镜下骨髓间充质干细胞原代培养形态观察Fig.1MorphologyofBM

3、SCsinprimarycultureunderaninvertedmicroscope(A)1d,×100;(B)3d,×100;(C)5d,×200;(D)7d,×200;(E)9d,×400;(F)13d,×400.结果二（二）原代小鼠骨髓MSCs的生长曲线结果BMSCs原代培养生长曲线（图2），生长曲线表明BMSCs的增殖能力很强，所测细胞在开始的前4天里生长缓慢处于潜伏适应期，第5天开始迅速增长进入对数生长期，到第9天细胞数轻度上升，第10天达到顶点，生长速度减缓进入平台期。四讨论分离骨髓MSCs的方法主要有四种：贴壁筛选法、密度梯度离心法、免疫磁珠分离法、流式分选

4、法等。我们使用密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，能有效地将红细胞、白细胞和间充质干细胞分离开来，同时操作简便，快速，对细胞的活性影响较小。且此分离法简单经济，因而被广泛应用。据本实验培养细胞的经验，如果操作中吸取界面层细胞不小心，会混进非单核细胞，就会大大降低细胞分离的纯度，使分离出的细胞大小不均。另外，细胞分离操作时间延长，操作不轻柔，分离出的细胞纯度降低，都会降低细胞的贴壁率和存活率。有时在相同的培养条件下，有极少数标本较难扩增骨髓MSCs，可能与冲洗骨髓腔的操作有关。骨髓MSCs具有黏附贴塑料瓶壁的特性，在实验中用玻璃瓶也能培养扩增。在原代培养物中，除了呈成纤维细胞样的M

5、SCs外，还混杂着一些其他细胞，可以根据这些污染细胞生物学特性将其除去。血清的浓度并非越高越好，相反，高浓度血清由于含有大量促进细胞分化的因子，已引起细胞分化，从而使细胞过早出现老化，反而不利于干细胞生长，一般以5%～10%胎牛血清最适合MSCs的生长。细胞接种密度过密，会引起细胞之间的接触抑制；而过稀又会导致细胞分泌的因子不足从而影响细胞的生长。一般适宜密度为（48）×104个/ml。讨论五结论本实验通过对成年小白鼠骨髓MSCs进行分离，体外培养，同时从细胞形态和生物学特性进行观察和检测，认为采用淋巴细胞分离液密度梯度离心，贴壁培养和消化时间控制相结合，可以获得纯度较高和活

6、性骨髓MSCs，具有操作简单，快速，实用等优点，为一种较为有效的分离纯化骨髓MSCs的方法。谢谢大家情绪测试成为有钱人是很多人都想做的事情，甚至白天晚上的做梦，都想成为有钱人，但是你会成为有钱人吗?从下面的心理测试是可以测试出来的，要不一起来做做下面的心理测试题吧。心理测试题：长途旅行时，你在火车上一般会做什么?A.闭眼休息B.欣赏风景C.与人聊天A.你习惯于强迫别人来适应自己的需求，缺乏耐心，因此成为有钱人的可能性很小。B.你追求闲适的生活，个性随和，不会抓住机会经营发展，所以你成为有钱人的可能性不大。C.你注重沟通，且喜欢交际，对知识的渴求度很高，是标准的发大财人选。手机

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