GUS染色教学教材.doc

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1、精品好文档，推荐学习交流一、原理Gus(b-glucuronidase)基因作为一种报告基因，在植物遗传转化研究中有广泛的用途。Gus基因来自于大肠杆菌，编码b－葡聚糖苷酶（一种水解酶），可催化底物5－溴－4－氯－3－吲哚葡聚糖醛酸苷（5－bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X－Gluc）分解，产生肉眼可见的深兰色化合物，借此用来观察转基因植物中外源基因的表达情况，鉴定转基因植株。二、目的了解转基因植物中基因表达的器官、组织和细胞的特异性，掌握Gus报告基因表达的组织化学定位的方法。三、材料与试剂1、转基因植物的组织、器官、种胚或幼苗。t2、同种

2、非转化植物的组织、器官、种胚或幼苗。3、50mM磷酸缓冲液(pH7.0)。4、染色液：100mM　K3[Fe(CN)6],100mMK4[Fe(CN)6]10mMNa2EDTA,0.001%(v/v)tritonX-100,20%甲醇，0.5mg/mlX-Gluc,磷酸缓冲液(50mM,pH7.0)。5、70％乙醇。四、操作步骤1、将准备好的材料冲洗干净，用吸水纸吸干，浸在上述染色液中37℃恒温条件下保温过夜。2、转入70％乙醇中脱色2－3次，去除叶绿素，至阴性对照材料呈白色时为止。3、肉眼或显微镜下观察，白色背景上的兰小点即为Gus基因表达的位点。4、83％、95％、100％乙醇中脱水

3、，二甲苯透明，石蜡包埋。仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3精品好文档，推荐学习交流5、常规石蜡切片法切片，番红染色。6、显微镜下观察、拍照。五、说明1、要设立严格的阴性对照，即用同样的未转化的材料按相同的方法同时进行染色。如阴性对照显示兰色，其原因可能是：A）材料和试剂被细菌感染；B）保温时间过长。2、染色液中的甲醇可抑制细菌生长，长时间染色可加入0.02%NaN3或100mg/ml的氯霉素，短时间染色也可以不加。3、叶绿体含量高的材料染色后要进行脱色。企鹅高伯伯好象看出了我的心思，当天下午就带我们登上了企鹅岛。我以前从电视里看到，企鹅差不多有小孩那么高。可现在一看，这个岛上的

4、成年企鹅只有一尺来高，未成年的就更小了，只有小猫那么大。岛上一共有三种企鹅，最漂亮的是金企鹅，嘴是金红色的，头部有两块白毛，又叫花脸企鹅。还有一种企鹅颈部有一圈黑毛，好象系帽子带儿。他们彬彬有礼，站在远处向我们点头，像欢迎我们似的。最凶猛的是阿德雷企鹅，我刚迈进他们的领地，一只企鹅就尖叫着把我驱逐出境了。他们的叫声很像毛驴，所以又叫驴企鹅。1.这段话描写了_____种企鹅，包括__________、__________、__________。仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3精品好文档，推荐学习交流1.这三种企鹅的特点分别是：__________、__________、____

5、______，请在文中找出有关词语填空。2.企鹅有多高？请用“__________”画出有关句子。3.为什么阿德雷企鹅又叫“驴企鹅”？______________________________________________________________________4.你最喜欢那种企鹅？请写出来为什么喜欢？______________________________________________________________________5.你能用几句话写一写你喜欢的一种动物的外形吗？_____________________________________________

6、_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3