GUS染色液配制讲解学习.doc

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1、一染色液配制1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。2）X－Gluc基液（50mMPBS，pH7.0）。配制方法：50mMNaH2PO4·0.78g/100ml；50mMNa2HPO41.79g/100ml共同溶解；Na2EDTA（10mM，372mg），Triton-100（0.1％，100μl）,K3[Fe(CN)6]（铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4[Fe(CN)6]（亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg）染色液：50μlX-Gluc母液＋450μl基液需要试剂：5-溴-4-

2、氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）；N-N-二甲基甲酰胺(DMF)；NaH2PO4；Na2HPO4；Na2EDTA；Triton-100；K3[Fe(CN)6]（铁氰化钾）；K4[Fe(CN)6]（亚铁氰化钾）二染色方法：1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。三实验原理适宜的反应条件下，β-葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观

3、察到。gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。四注意事项用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处

4、理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。一．对比选择型作文模板Topic: Topic:参考①的内容①Whenitcomesto       ,differentpeopleholddifferentviews.①两种观点针对的争论焦点②Somecontendthat               观点一③Foronething,              观点一的理由1④Foranother,              观点二的理由2⑤Inspiteofallthes

5、eclaims,othersmaintainthat     与观点一对立的观点二⑥Theypointoutthat          观点二的理由1⑦Anotherinstanceoftencitedisthat        观点二的理由2 ⑧It’snoeasytasktofindasatisfactoryanswertotheissue.⑨Asforme,there’ssometruthtobotharguments.                 ⑩It’sadvisableto          个人的结论 二.现象解释型作文模板①Recently,       

6、            描述现象，引起话题②Whatamazesusmostis        表现较为典型的一个方面③Itistruethat             对于现象做出的评论④Therearemanyreasonsexplaining     承上启下,解释这一现象的原因⑤Themainreasonis                说明原因一⑥Whatismore,                原因二⑦Thirdly,                 原因三⑧Asaresult,                   讲述导致的结果⑨Consideringall

7、these,            作者的态度⑩Foronething,               观点一