gus报告基因检测

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划gus报告基因检测　　一、实验原理：　　1、适宜的反应条件下，β-葡萄糖苷酸酶可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。　　二、实验步骤：　　1、将准备好的拟南芥植株放入小EP管中，加入染色液浸没试材，封好盖子；　　2、37℃培养箱中温育1小时至过夜；　　3、将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色为止。　　4、观察结果。　　三、实验结果：　　转基因拟南芥野生型拟南芥　　转基因拟南芥；

2、野生型拟南芥转基因拟南芥　　四、分析讨论：　　1、预期结果：转基因植株被染成蓝色，野生型植株不被染色。　　实际结果：与预期结果一致，但野生型脱色不完全，有几片叶子的叶绿素未被脱掉。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　分析：实验较为成功。由上图可知，转入的基因在整棵植株都有表达，其中蓝色在叶脉中最深，推测转入的基　　因在叶脉中表达最多。在野生型植株中，大部分叶子被乙醇脱去叶绿素而呈现浅黄色

3、。　　2、gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。　　3、gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。　　4、gus基因是一种报告基因，报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节

4、序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功能的研究实验中。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　5、报告基因必须具备的条件有：(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无

5、相似的内源性表达产物;(3)报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定；(4)细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的检测。　　6、利用报告基因表达载体的研究技术的优点有：(1)避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录活性，不会受到内源性基因表达产物水平的影响；(2)易于检测：如果研究不同基因启动子的转录活性，采取本身基因表达产物的检测方法，必须建立各种基因表达产物的检测方法，有些基因的表达产物的检测技术还不具备，或者很难建立，而采用报告基因的研究策略就很容易解决这一问题，只要建立稳定的报告基

6、因表达的检测技术就可以用于不同基因启动子转录活性的检测和研究。　　1．GUS报告基因的定性检测　　GUS能与显色底物X-gluc反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS染色的稳定性好，组织定位精确，成为在植物中运用很广的报道基因。　　GUS染色底物的配制　　按下表1配制GUS染色的底物。　　表1.GUS染色底物的配制目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计

7、划　　GUS能与底物MUG反应产生荧光物质MU。MU的激发波长为365nm，发射波长为456nm，其含量可由荧光分光光度计测出。因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS含量。　　试剂配制　　1)1mol/LNa2HPO4溶液：Na2HPO4溶于100ml水。　　2)1mol/LNaH2PO4溶液：NaH2PO4溶于100ml水。　　3)磷酸缓冲液()：1mol/LNa2HP