平喘巴布剂药材提取工艺探究

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1、平喘巴布剂药材提取工艺探究　　[摘要]目的优选平喘巴布剂药材的提取工艺。方法采用L9（34）正交试验法，对药材乙醇提取时间、乙醇用量、乙醇浓度和提取次数等影响因素，以芥子碱硫氰酸盐提取率为考察指标，优选平喘巴布剂药材提取工艺。结果最佳提取工艺为用6倍量70%的乙醇回流提取2次，每次2h。结论优选的提取工艺合理，为该复方的透皮吸收特性的研究奠定良好的基础。[关键词]平喘巴布剂；提取工艺；芥子碱硫氰酸盐；正交试验[中图分类号]TQ461[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2013）10（b）-0108-049平喘巴布剂源于《张氏

2、医通》，是由芥子、延胡索、甘遂、细辛等几味药材组成，具有利气祛痰散寒逐饮之效，多用于穴位敷贴防治哮喘，属于经皮给药系统，疗效确切，且在临床上具有广泛的应用基础[1-2]。在经皮给药制剂中，确保足够量的药物透过皮肤进入体内达到有效的血药浓度是关键，方中芥子、延胡索、甘遂、细辛的主要活性成分均适合于乙醇提取[3-6]，而芥子又为方中君药，主要含季铵盐生物碱芥子碱类成分，广泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子碱，多以硫氰酸盐形式存在，芥子碱硫氰酸盐（Sinapinethiocyanate，ST）具有镇咳、祛痰、平喘、抗氧化、抗衰老、抗雄激素

3、、降血压等多种生物活性[3-7]。因此本研究采用正交试验法，以芥子碱硫氰酸盐的提取率为指标，优选药材乙醇提取工艺，确定最佳提取条件，为平喘巴布剂体内外透皮吸收特性的研究奠定物质基础。1仪器与试药1.1药品与试剂芥子碱硫氰酸盐对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111702-201002）；芥子、延胡索、甘遂、细辛等（广州致信中药饮片有限公司）；磷酸二氢钾、乙醇为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为怡宝水。1.2仪器LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；高速中药粉碎机（浙江瑞安市永历制药机械有限公司）；旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂

4、）；KQ-500型超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；AUW120D精密分析天平（日本岛津公司）。2方法与结果2.1含量测定方法的建立2.1.1色谱条件色谱柱：迪马PlatisilODS柱（5μm，250mm×4.6mm），以Phenomenex为保护柱；流动相：乙腈-0.1mol/L的磷酸二氢钾=14∶86；检测波长：326nm；流速：1.09mL/min；柱温：室温；进样量：10μL。理论塔板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算不低于3000。2.1.2溶液的配制2.1.2.1对照品溶液的配制精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的芥子碱硫氰酸盐对照

5、品5.67mg，于100mL的容量瓶中，用流动相溶解制成56.7μg/mL的对照品溶液。2.1.2.2对照药材溶液的制备精密称取芥子对照药材细粉1.12g，置具塞的锥形瓶中，加甲醇50mL，超声（功率250W，频率20KHz）提取3次，每次20min，滤过，滤液减压回收溶剂至干，残渣用流动相溶解并转移至50mL的容量瓶中，定容，再用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.1.2.3供试品溶液的制备按照处方比例称取芥子、延胡索、细辛和甘遂，9份，分别按L9（34）正交试验表进行实验，每次提取后趁热过滤，药液用旋转蒸发仪浓缩至药材量1

6、∶1的浓缩液，放至室温后，加水定量至20mL。然后精密吸取1～9号提取液各0.2mL，置10mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得1～9号正交试验的供试品溶液。2.1.2.4阴性样品溶液的制备按处方比例称取除芥子外的其他药材，与供试品溶液同法制备。2.1.3方法学考察92.1.3.1线性范围考察分别精密吸取上述芥子碱硫氰酸盐对照品溶液2、6、10、15、20μL进样，测定，以芥子碱硫氰酸盐峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，线性回归分析，得标准曲线方程：Y=3×106X-

7、29592，r=0.9999。结果表明芥子碱硫氰酸盐进样量在0.1134～1.1340μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。2.1.3.2精密度试验精密吸取芥子碱硫氰酸盐对照品溶液10μL，连续进样6次，测定，按芥子碱硫氰酸盐的峰面积积分值计算RSD为0.58%，表明该仪器具有良好的精密度。2.1.3.3稳定性试验精密吸取正交试验5号供试品溶液10μL，分别于0、2、4、8、12h进样，测定芥子碱硫氰酸盐峰面积，计算其RSD为1.08%，表明样品溶液在12h内稳定。2.1.3.4重复性试验取正交试验5号浓缩液，加水定容至20mL，

8、再精密吸取0.2mL，5份，按“2.1.2”项下供试品溶液制备方法，制备样品，分别进样10μL，测定，计算芥子碱硫氰酸盐含量平均值为0.536%，RSD为1.06%。结果表明方法重复性良好。2.1.3.5加