实验五植物细胞骨架观察课程讲课稿.ppt

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1、实验五植物细胞骨架观察课程胞间连丝油镜的番茄表皮细胞的胞间连丝查效兵、李云峰组实验五植物细胞骨架显示与观察问题1、什么叫细胞骨架？2、广义的细胞骨架指什么？3、狭义的细胞骨架又指什么？4、20-25nm_______;6-7nm___________8-11nm______一、目的与要求1、了解植物细胞骨架制片方法和其成分显示的原理2、掌握考马斯亮蓝R250染色方法3、观察细胞骨架在细胞中的分布情况二、原理细胞骨架指细胞质中纵横交错的纤维网络结构。可分为微管、微丝和中间纤维，它对细胞形态维持、细胞生长、运动、分裂、分化和物质的运输等起着重要的作用。当细胞用适当浓度的Triton-

2、X-100处理时，可将质膜中和细胞内蛋白质溶解，而骨架系统的蛋白质不被破坏，经固定和考马斯亮蓝R250染色后，可使骨架蛋白着色而被显示。三、材料、器材与试剂1、材料新鲜洋葱鳞茎的内表皮2、器材滴管、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、10mL小烧杯、显微镜、恒温水浴锅等3、试剂1）M－缓冲液：咪唑（pH6.7）50mM、MgCl20.5mM、KCl50mM、EGTA[乙二醇双（α－氨基乙基）醚四乙酸]1mM、巯基乙醇或DTT（二硫苏糖醇）1mM、EDTA0.1mM2）磷酸缓冲液（PBS）3）1%Triton-X-100（用M－缓冲液配制）4）0.2%考马斯亮蓝R250：考马斯亮蓝R250

3、0.2g、甲醇46.5mL、冰醋酸7.0mL、蒸馏水46.5mL5)植物细胞固定液：5ml38%甲醛、5ml冰醋酸、90ml70%酒精和5ml甘油四、实验步骤1、取材：内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。2、抽提：吸去PBS缓冲液，取2ml1%Triton-100入小烧杯中，置于37℃恒温水浴锅中保温30min。3、冲洗：吸去1%Triton-X-100，用M缓冲液轻洗三次，每次5min。4、固定：加植物固定液2ml固定30min5、冲洗：弃去固定液后，用PBS缓冲液清洗三次，每次1-2min6、染色：吸去PBS，滴1滴0.2考马斯亮蓝R25

4、0染液染色5min7、制片：倒去染液，用蒸馏水清洗三次，将标本平铺在载玻片上，再盖上盖玻片。8、观察五、实验结果绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。六、讨论1．对实验结果的分析2．实验中的注意事项和关键步骤七、实验报告与值日此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢