实验五 植物细胞骨架的光学显微观察

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1、实验五植物细胞骨架的光学显微观察——2010级生物技术冯德实验目的观察光学显微镜下细胞骨架的结构了解显示植物细胞骨架的方法及其原理实验原理细胞骨架是指在细胞中支持和连接细胞各组分，以及与细胞运动有关的结构，它包括微管、微丝、中间纤维。当用适当浓度的TritonX一100(非离子表面活性剂)处理时，可将细胞内大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白质却仍被保存经过戊二醛固定和考马斯亮蓝R250染色，从而在光镜下观察到细胞骨架的网状结构。实验用品器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子材料：洋葱鳞茎试剂：1、M一缓冲液2、6mmol／LP

2、H6．8磷酸缓冲液。3、1％TritonX一100，用M-缓冲液配。4、0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml，冰乙酸7ml，蒸馏水46.5ml。5、3％戊二醛，用6mmol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配制。6、50％、70％、95％乙醇（永久制片用）。7、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶(永久制片用)。实验方法取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片置于装有PH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉吸去磷酸缓冲液用1％TritonX一100处理（20-30min）吸去TritonX—100用M-缓冲液洗3次，每次10分钟3％戊二醛固定0

3、.5—1小时PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10min用0.2％考马斯亮蓝R250染色20—30min用蒸馏水洗1—2次材料置于载玻片上，加盖玻片，镜检用TritonX-100的缓冲液处理材料时，应控制在30min左右在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好植物细胞骨架微丝结构图