实验五植物细胞骨架观察

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1、透明软骨弹性软骨胞间连丝油镜的番茄表皮细胞的胞间连丝查效兵、李云峰组实验五植物细胞骨架显示与观察问题1、什么叫细胞骨架？2、广义的细胞骨架指什么？3、狭义的细胞骨架又指什么？4、20-25nm_______;6-7nm___________8-11nm______一、目的与要求1、了解植物细胞骨架制片方法和其成分显示的原理2、掌握考马斯亮蓝R250染色方法3、观察细胞骨架在细胞中的分布情况二、原理细胞骨架指细胞质中纵横交错的纤维网络结构。可分为微管、微丝和中间纤维，它对细胞形态维持、细胞生长、运动、分裂、分化和物质的运输等起

2、着重要的作用。当细胞用适当浓度的Triton-X-100处理时，可将质膜中和细胞内蛋白质溶解，而骨架系统的蛋白质不被破坏，经固定和考马斯亮蓝R250染色后，可使骨架蛋白着色而被显示。三、材料、器材与试剂1、材料新鲜洋葱鳞茎的内表皮2、器材滴管、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、10mL小烧杯、显微镜、恒温水浴锅等3、试剂1）M－缓冲液：咪唑（pH6.7）50mM、MgCl20.5mM、KCl50mM、EGTA[乙二醇双（α－氨基乙基）醚四乙酸]1mM、巯基乙醇或DTT（二硫苏糖醇）1mM、EDTA0.1mM2）磷酸缓冲液（PBS）

3、3）1%Triton-X-100（用M－缓冲液配制）4）0.2%考马斯亮蓝R250：考马斯亮蓝R2500.2g、甲醇46.5mL、冰醋酸7.0mL、蒸馏水46.5mL5)植物细胞固定液：5ml38%甲醛、5ml冰醋酸、90ml70%酒精和5ml甘油四、实验步骤1、取材：内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。2、抽提：吸去PBS缓冲液，取2ml1%Triton-100入小烧杯中，置于37℃恒温水浴锅中保温30min。3、冲洗：吸去1%Triton-X-100，用M缓冲液轻洗三次，每次5min

4、。4、固定：加植物固定液2ml固定30min5、冲洗：弃去固定液后，用PBS缓冲液清洗三次，每次1-2min6、染色：吸去PBS，滴1滴0.2考马斯亮蓝R250染液染色5min7、制片：倒去染液，用蒸馏水清洗三次，将标本平铺在载玻片上，再盖上盖玻片。8、观察五、实验结果绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。六、讨论1．对实验结果的分析2．实验中的注意事项和关键步骤七、实验报告与值日