液相色谱法ppt课件.ppt

《液相色谱法ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第七章：高效液相色谱法学习要求了解高效液相色谱法的主要类型；熟悉高效液相色谱仪的基本结构；掌握高效液相色谱法的基本理论、定性与定量方法。1第一节：概述高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。2第一节：概述经典液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。现代液相色谱法引用了气相色谱的

2、理论，流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9107Pa);色谱柱以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。3第一节：概述一、液相色谱与气相色谱的比较液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论（塔板理论与速率方程）也与气相色谱基本一致

3、。在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，液体和气体的性质不相同；液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面：4第一节：概述1.应用范围不同气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受到一定程度的限制，只有大约20%的有机物能用气相色谱分析。液相色谱不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、

4、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70～80%。5第一节：概述2.液相色谱能完成难度较高的分离工作气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。在液相色谱中流动相液体与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离的选择性。6第一节：概述液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等，作为分析时选择余地大；而气相色谱较少，选择面窄。液相色谱通常在室温下操作。可在较低的温度下进行，一

5、般有利于色谱分离条件的选择。7第一节：概述3.液体的扩散性比气体的小105倍，溶质在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。4.液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。5.液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。8第一节：概述综上所述，高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成为现代分析技术的重要手段之一，目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛

6、的应用。9第二节:高效液相色谱仪二、液相色谱分离原理及分类分离的实质是样品分子(溶质)与溶剂(流动相或洗脱液)以及固定相分子间的作用。作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。10第二节:高效液相色谱仪液相色谱分离系统由两相：固定相和流动相。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。根据分离机制不同，液相

7、色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。11第二节:高效液相色谱仪高效液相色谱仪由：高压输液系统进样系统分离系统检测系统控制、记录、数据处理系统等五大部分组成（P183）。12第二节:高效液相色谱仪构成HPLC的关键部件泵色谱柱检测器13第二节:高效液相色谱仪一、高压输液系统高压输液系统的组成：溶剂贮存器高压输液泵过滤器梯度洗脱装置14第二节:高效液相色谱仪1.溶剂贮存器溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2L，用来贮存足够数量、符合要求的流动

8、相。2.高压输液泵高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。15第二节:高效液相色谱仪高压输液泵，按其性质可分为两大类：恒流泵（往复式柱塞泵）P184图6-4能给出恒定流量的泵，其流量与流动相粘度和柱渗透无关。恒压泵（气动放大泵）P184图6-3保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生变化，恒压