高效液相色谱法ppt课件.ppt

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1、第八章高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)18.1概述第八章高效液相色谱法8.2高效液相色谱仪8.3主要分离类型和原理8.4高效液相色谱固定相8.5高效液相色谱流动相8.6影响分离的因素8.7分离类型的选择28.1概述1.高效液相色谱法在经典液相色谱基础上，引入气相色谱的理论而发展起来的，以液体为流动相的现代柱色谱分离分析方法。HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器。3经典LCHPLC柱之内径1~5cm~0.4cm长度50~100cm15~50cm填充材料粒度150µm~200µm4µm

2、~10µm使用压力1~10atm50~200atm分离时间0.5h~天0.05~1h2.高效液相色谱和经典液相色谱的比较8.1概述48.1概述3.高效液相色谱和气相色谱的比较分析对象及范围：GC——气体和低沸点的稳定化合物——只占有机物总数的20%；HPLC——高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物——占有机物总数的80%。58.1概述流动相的选择：GC——有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC——液体或各种液体的混合——除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作

3、温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。68.1概述4.高效液相色谱法的特点高柱效优点：“三高”“一快”“一广”高灵敏度高选择性分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格78.1概述5.高效液相色谱法的适用对象高效液相色谱适用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性物质和天然产物；合成和高分子化合物，以及无机和有机离子型化合物。88.1概述6.高效液相色谱法的应用生命科学：氨基酸、多肽、蛋白质，核碱、核苷、核苷酸、核酸（RNA、DNA）等生命物质的纯化和分析；

4、药物分析：合成药物的纯化及质量控制，中草药有效成分的分离、制备及纯度测定以及临床医学的药代动力学研究中的分离分析。98.1概述食品分析：①食品本身组成,特别是营养成分，如糖、有机酸、维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪的分析；②食品添加剂，如防腐剂、抗氧化剂、合成色素、甜味剂和保鲜化学物质的分析；③食品污染物，如农药残余和黄曲霉素等的分析。108.1概述环境监测：用于分子量大,挥发性低、热稳定性差的有机污染物的分离和分析。如多环芳烃、酚类、多氯联苯、邻苯二甲酸酯类、联苯胺类、阴离子和非离子表面活性剂、有机农药等。118.1概述精细化工：具有较高分子量和较高沸点的有机化合

5、物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、醛和酮、醚、酸、酯等化工原料，以及各种表面活性剂、药物、农药、染料、炸药等化工产品的分析。制备分离:在许多科学研究和生产领域，往往需要制备或提取一些高纯化合物。128.2.1示例8.2.2结构8.2.3主要部件8.2高效液相色谱仪138.2.1示例148.2.1示例158.2.1示例168.2.2结构17色谱柱进样器泵及控制器数据处理及控制在线脱气机检测器8.2.3主要部件188.2.3主要部件1.高压输液系统由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最

6、重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。19机械注射泵机械往复泵多用于流量要求在1-50L/min范围的微型HPLC或毛细管柱HPLC中活塞泵隔膜泵8.2.3主要部件高压输液泵要求：密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调流量范围宽，耐腐蚀。分类：恒流泵（机械泵）恒压泵208.2.3主要部件1.高压输液系统马达往复式拉动密封溶剂球阀脉动阻尼器到色谱柱机械往复柱塞泵示意图21在分离过程中使用两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，使流动相的强度、极性、pH或离子强度发生变化，从而改变被测组分

7、的相对保留值，提高分离效率。作用类似于气相色谱中的程序升温。8.2.3主要部件2.梯度淋洗装置22外梯度（高压梯度）:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。8.2.3主要部件8.2.3主要部件23内梯度（低压梯度）:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。8.2.3主要部件8.2.3主要部件243.进样系统8.2.3主要部件直接注射进样：操作方便，可获得高的柱效，但不能承受高压；进样方式停留进样：高压泵停止供液，体系压力下降时，将样品直接加入到柱头。此法操作不便，重现性

8、差，不得已