《高效液相色谱法》ppt课件

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1、高效液相色谱法（HPLC）色谱法定义色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体，由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。目录一、液相色谱分析法的发展二、液相色谱分析法的特点三、液相色谱仪四、液相色谱分析法的原理五、高效液相色谱法的主要类型及原理六、高效液相色谱分析法的应用七、分离数据

2、的处理方法八、参考文献一、液相色谱分析法的发展20世纪初：俄国植物学家茨维特提出经典液相色谱法。经典液相色谱法包括柱色谱、薄层色谱、纸色谱。20世纪60年代末：随着色谱理论的发展、高效细微固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏度检测器的应用，高效液相色谱法得到了突破性的发展。类比液柱色谱法和跑道赛跑二、液相色谱分析法的特点在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化。兼具分离和分析功能，可以在线检测。高效液相色谱法的突出特点：1）高压（150－350*105Pa）2）高速3）高效4

3、）高灵敏度（高灵敏度的检测器：紫外10-9g，荧光10-11g）三、液相色谱仪（1）三、液相色谱仪（2）四、液相色谱分析法的原理（一）高效液相色谱分析的流程1、由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。2、被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。3、废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而ＨＰＬＣ改变的是流动相极

4、性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。四、液相色谱分析法的原理（二）高效液相色谱的分离过程同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。流动相固定相640000031186279流动相固定相分配系数：物质在两相溶剂中分配平衡时的比例分配系数：1分配系数：33232321616161616168888操作过程图示四、液相色谱分析法的原理不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间

5、的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。五、高效液相色谱法的主要类型及原理1、液-液分配色谱2、液-固吸附色谱3、离子交换色谱4、离子对色谱5、离子色谱6、排阻色谱7、亲和色谱(AC)1、液-液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固

6、定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。2、液-固吸附色谱基本原理：各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。特点：适用于分离相

7、对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附，常引起峰的拖尾举例：苯乙胺类药物中重酒石酸去甲肾上腺素注射液的高效液相色谱测定法。色谱条件与系统适应性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.14%更烷基磺酸钠溶液——甲醇(65:35)，用磷酸调节PH值至3.0作为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。理论板数按重酒石酸去甲肾上腺素峰值计算应不低于3000。反相高效液相色谱法即指流动相的极性大于固定相极性的色谱方法。在本法中常采用化学键合相作为固定相，流动相采用水—

8、—甲醇或水——乙腈系统，在反相色谱中，极性强的组分在分离时先流出柱子，极性弱的组分后流出。因此适合于共存组分极性差异较大的样品分析。如高效液相色谱测定硫酸阿托品片的含量。举例：巴比妥类药物苯巴比妥、苯妥英和卡马西平均为临床上常用的抗癫痫药，其药物浓度与疗效和毒副反应密切相关。临床上常将三种药物同时使用，为提高疗效，减