液相色谱法PPT课件

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1、第八章液相色谱分析第一节概述第二节柱色谱法第三节薄层色谱法第四节纸色谱法色谱法(chromatography)概述历史：1903年，俄国植物学家MikhailTswett最先发明。他采用填充有固体CaCO3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素chlorophylls&xanthophylls)加于柱顶端，然后以石油醚淋洗，被分离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱(希腊语“chroma”=color;“graphein”=write)。概述在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相；自上而下运动的一相（一般是气

2、体或液体）称为流动相；装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱。当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。色谱法的分类按两相状态分类固定相流动相1.气体为流动相的色谱称气相色谱（gaschromatography,GC）固体液体液体气体气相色谱气-固色谱（GSC）气-液色谱（GLC）色谱法的分类2.液体为流动相的色谱称液相色谱（liqudchromatography,LC）液相色

3、谱液-固色谱（LSC）液-液色谱（LLC）色谱法的分类按分离机理分类1.利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为吸附色谱法。2.利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。3.利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法。色谱法的分类4.利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或分子排阻色谱法。最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。色谱法的分类吸附色

4、谱：不同组份在固定相的吸附作用不同；分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同；离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的亲和力不同；凝胶色谱（尺寸排阻色谱）:不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。色谱法的分类按操作形式分类1.固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。2.固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。色谱法基本原理分配系数K在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度(或溶解度)之比值，即色谱法基本原理色谱机理不同，分配系数的含义不同：吸附色谱—K为吸附平衡常数分配色谱—K为分配系数离子交换色谱—K为交换系数分子

5、排阻色谱—K为渗透系数色谱法基本原理色谱分离过程的特点:1.差速迁移;2.谱带扩展.色谱法的定义:色谱法是利用混合物各组分在两相(固定相和流动相)中分布的差异，使固定相对各组分的保留作用不同产生差速迁移而得到分离的一种物理化学分离分析方法。色谱法基本原理分配系数与保留行为的关系溶质在色谱柱中被保留的程度常用保留比（retentionratio）R表示。R≤1第二节柱色谱法一、液－固吸附柱色谱法二、液－液分配柱色谱法三、离子交换柱色谱法四、凝胶柱色谱法五、柱色谱法的应用第二节柱色谱法将固定相均匀填在金属或玻璃制成的管中做成层析柱，并以此进行分离的方法叫柱色谱法。根

6、据作用原理，可分为：吸附柱色谱法分配柱色谱法离子交换柱色谱法凝胶柱色谱法第二节柱色谱法一、液－固吸附色谱法liquid-solidadsorptionchromatography固定相—固体吸附剂流动相—液体原理：利用吸附剂对不同组分的吸附能力的差异而实行分离。第二节柱色谱法吸附作用固体吸附剂是一些多孔性物质，表面上有许多吸附点或称吸附中心。吸附剂之所以具有吸附作用，主要靠吸附剂表面的吸附点位。硅胶吸附剂：第二节柱色谱法吸附平衡Xm+nYaXa+nYm吸附平衡常数式中：X—溶质分子；Y—流动相分子m—流动相；n—流动相分子系数；a—吸附剂表面组分的吸附系数Ka越

7、大，越容易被吸附，保留时间越长，流出色谱柱就越慢。第二节柱色谱法吸附剂极其选择对吸附剂的要求：1.具有较大的表面积与适宜的活性。2.与流动相极其样品中各组分不发生化学反应，在流动相中不溶解。3.吸附剂颗粒应有一定的细度，并且颗粒要均匀。第二节柱色谱法常用的吸附剂有：氧化铝、硅胶、聚酰胺硅胶：呈微酸性适用于分离酸性和中性物质，如：有机酸、氨基酸、萜类、甾类等的分离。硅胶具有多孔性的硅氧交联结构硅胶骨架表面有许多硅醇基硅胶骨架表面的羟基与水结合形成水合硅醇基第二节柱色谱法硅胶结构加热500oC时，交联内部的结构水不可逆的失去，硅醇结构变为硅氧烷结构。硅胶结构第二节柱

8、色谱法氧化铝碱性（pH=