微生物实验课件：沉淀反应.ppt

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1、沉淀反应沉淀反应Ag+Ab可溶性抗原（如血清、毒素等）温度、pH浓度、电解质抗原抗体复合物分类沉淀反应环状沉淀反应絮状反应琼脂扩散试验双向扩散单向扩散＋电泳技术火箭免疫电泳对流免疫电泳一、双向琼脂免疫扩散试验实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线（阳性反应）。沉淀线的形态、清晰度及位置反映抗原或抗体的特异性和浓度等。利用已知抗原或抗体检测未知抗体或抗原。实验目的：待测的标本甲或乙中是否含有AFP（alphafetalprotein）实验材料：1％盐水琼脂，诊断血清（AFPAb）,阳性

2、血清（含AFPAg），生理盐水（NS），待检血清甲、乙。载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。实验方法：1、融化1％盐水琼脂；2、制备半固体琼脂凝胶板：4~4.5ml/片3、打孔：梅花孔4、加样（每孔约10μl）；5、标记，放湿盒，37℃温箱24h后观察结果。诊乙阴乙阳甲甲AbAg结果判读：阳性血清与诊断血清间形成沉淀线生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线待检血清、阳性血清与诊断血清间形成沉淀线且融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。诊乙阴乙阳甲甲二、对流免疫电泳【实验原理】蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极

3、移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。对流免疫电泳实验原理电泳力电渗力【实验材料】1．电泳缓冲液：pH8.6巴比妥缓冲液。2．抗体：诊断血清（AFP抗体）。3．抗原：阳性血清、待检血清甲乙。4．1％盐水琼脂。5．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。【实验方法】1．制板2．打孔：双排孔3．加样4．电泳将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗

4、体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压6～10V/cm板长，电泳约30～60min。5．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。正极负极AgAbAgAb甲诊NS诊阳诊甲诊乙诊乙诊甲诊NS诊阳诊甲诊乙诊乙诊【实验结果】将玻片对着强光源观察，生理盐水孔与诊断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血清之间有白色沉淀线，若待检血清孔与诊断血清孔之间有沉淀线出现，则表示AFP阳性，否则为阴性。注意事项1.铺板过程要一气呵成，均匀平整，厚度适当2.加样不能溢出，不能加错，不能交叉污染环状沉淀反应，又称环状试验。主要用于抗原的定性试验。用已知抗体来检测未

5、知抗原。在小口径试管中先加入已知抗血清，然后将待检抗原小心地加在血清的表面，成为界面清晰的两层。数分钟后，两界面交界处出现白色沉淀环，为阳性反应。本试验常用做抗原定性，如炭疽的诊断（Ascoli氏试验）、鉴别血迹、媒介昆虫的嗜血性等。絮状沉淀反应：絮状沉淀反应是将抗原与血清在试管内混合，在电解质存在的情况下，抗原抗体复合物可形成混浊沉淀或絮状沉淀凝聚物，此法通常用于毒素与抗毒素的滴定。如诊断梅毒的康氏反应（Kahntest）。电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷。