《实验沉淀反应》PPT课件

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1、实验二沉淀反应定义：可溶性Ag+相应Ab形成肉眼可见的沉淀物质（Ag-Ab复合物）实验内容对流免疫电泳双向琼脂扩散试验试剂和器材双扩实验：标本1、标本2、阳性对照、阴性对照、Ab（抗白蛋白）、1.2%的琼脂、湿盒、37度温箱等对流实验：对流Ag、Ab（抗白蛋白）、pH8.6的巴比妥缓冲液、1.2%的琼脂、电泳仪、电泳槽、加样器双向琼脂扩散试验原理：定性试验。将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上相对应的孔内，抗原抗体从孔内向四周扩散，在两者对应比例适宜处形成沉淀线。意义：可用已知抗原（抗体）来检测未知的抗体（抗原），同时检测抗原抗体的纯度。

2、临床上常用来检测甲胎蛋白（AFP），作为原发性肝癌等的辅助诊断。实验方法（1）制板：4ml/块（2）打孔：孔径3mm，孔间距5mm。（3）加样（各10ul）：：标本1：标本2：阳性对照：Ab（4）扩散：置湿盒37°C、24小时观察结果。231123实验方法（1）制板：4ml/块（2）打孔：孔径3mm，孔间距5mm。（3）加样（各10ul）：：标本1:标本2：阴性对照：阳性对照：Ab（4）扩散：置湿盒37°C、24小时观察结果。561426423153结果判断1.在阳性对照孔与中间的抗体孔之间出现一条或多条白色沉淀线（一对抗原抗体系统即可出现

3、一条沉淀线，如有多对抗原抗体可出现多条沉淀线）。2.观察标本孔与中间的抗体孔之间有无出现沉淀线，有即为阳性，无即为阴性。对流免疫电泳原理：利用电场的作用加强和加快双向扩散的一种方法。在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中进行电泳，带有较多负电荷的Ag泳向阳极，而Ab球蛋白等电点偏高（约为6--7），在pH8.6时带负电荷较少，加上分子量较大，泳动慢，受电渗（指电场中液体对固体支持物的相对移动）干扰后向阴极倒退，这样抗原抗体作相对运动，在较短时间内即可相遇，在孔间两者分子比例合适的地方形成沉淀线。实验方法（1）制板：吸取融化的热琼脂4ml，均匀加在平

4、坦的载玻片上，待冷却后再移动。（2）打孔：孔径3mm，孔间距5mm（3）加样（10ul）：1.Ag2.Ab（4）电泳:稳压100V,30min。（5）结果观察：在Ag和Ab之间出现一条白色沉淀线。+12结果判断1.有沉淀线：+无沉淀线：-2.沉淀线的位置与Ag、Ab分子电荷情况有关，也与Ag、Ab比例有关。3.特点：优：操作简便，观察结果快，敏感度比双扩高8-16倍。缺：分辨率差，当有多种Ag、Ab系统存在时，形成的沉淀线位置易重叠，难以分辨，所以用此目的时，不如双扩。意义：对流免疫电泳主要用于检测标本中的抗原如AFP、HBsAg等。本法较

5、双向琼脂扩散时间大为缩短（一般只需30分钟到1小时），且灵敏度比双扩高约数十倍。注意事项1、浇琼脂板时注意动作要迅速，琼脂不要溢出玻片，成品琼脂板平整无气泡，打孔时，不要将琼脂划破；2、加样时，不要溢出孔外；3、加样用的枪头不要混用。