沉淀反应PPT课件.ppt

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1、沉淀反应（precipitationreaction)可溶性抗原+相应抗体→肉眼可见的沉淀一、定义：凝集反应沉淀反应抗原性质颗粒性抗原/可溶性抗原致敏颗粒可溶性抗原反应时间几分钟至十几分钟数小时至数天反应产物凝集块沉淀物稀释物稀释抗体稀释抗原形成肉眼可见的大的免疫复合物。沉淀线(环)的观察以及免疫比浊法中的终点法就是测定此阶段形成的复合物第一阶段第二阶段二、沉淀反应分两个阶段抗原抗体特异性结合，快速但不可见。免疫比浊法中的速率法就是利用此阶段测定免疫复合物形成的速率。1897年Kraus就发现细菌培养液（毒

2、素）与相应抗血清混合出现沉淀1905年Bechhold把抗体放在明胶中，将抗原加于其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行1946年Oudin报告了试管免疫扩散技术1965年Mancini提出单向免疫扩散技术，使定性免疫试验向定量化发展1959年Schultze建立透射比浊法1967年Ritchie建立散射比浊法1977年Sternberg建立速率散射比浊法发展趋势：快速、微量、自动化。三、发展史：液体内沉淀试验凝胶内沉淀试验凝胶免疫电泳技术沉淀反应可分三类免疫浊度测定絮状沉淀试验单向扩散试验双向扩散试验对流免疫电

3、泳火箭免疫电泳免疫固定电泳第一节液相内沉淀试验一、絮状沉淀试验:(flocculationtest)二、环状沉淀试验:(ringprecipitationtest)三、免疫浊度试验:(immunoturbidimetry)原理一、絮状沉淀试验(flocculationtest)方法评价：敏感度较低、简便、易受抗原抗体比例影响最适比临床意义：测定抗原抗体反应的最适比。37℃抗原抗体康氏试验：梅毒抗体康氏试验康氏试验是又称非特异类脂质抗原试验,可用于梅毒筛查。原理:使用酒精浸泡牛心粉，提取磷脂部分做为抗原，加入

4、胆固醇以增加灵敏度，与待测血清中抗体(反应素)，在电解质作用下，抗原抗体形成可见的沉淀反应。请问目前常用的梅毒筛查有哪些方法?梅毒感染的确证实验有哪些?抗原稀示意图释1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量不变振摇混匀、37℃孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管。轻摇絮状沉淀试验AgAbAg抗体稀释度抗原稀释度1／101／201／401／801／1601／3201／640对照1／5+++++++++++++／--1／10+++++++++++++-1／

5、20+++++++++++++-1／40-+／-+++++++++-1／80----+++-方阵滴定法原理二、环状沉淀试验(ringprecipitationtest)方法评价：敏感度较低、简便、快速、实用、只能定性不能定量、缺乏多对分辨力。临床意义：鉴定血迹、诊断炭疽AbAg沉淀管内径1.5～2mm阳性：1～5min出现沉淀环阴性：30min不出现沉淀环三、免疫浊度试验1.透射比浊法（transmissionturbidimetry)2.免疫胶乳比浊法(immunolatexturbidimetry)3.

6、散射比浊法（nephelometry)①速率散射比浊法(ratenephelometry)②终点散射比浊法(endpointnephelometry)返回海德堡进行的沉淀分析1、在抗体浓度过量时，随着抗原浓度不断上升免疫沉淀逐渐增多　（如右图）原理：抗原抗原抗体复合物检测器检测器透射测定散射比浊2.抗原抗体复合物，在一定光线照射下，可产生散射光及透射光，并用仪器检测这些光的强度，可反应抗原抗体复合物的量。原理：I0入射光透射光I吸光度A=lgI0/I＝k1bC复合物Ag-Ab复合物1.原理：一）透射比浊法C

7、复合物＝k2C抗原（Ab过量）吸光度A＝k3C抗原足够大（35-100nm），要形成一定浊度稀释待检样品和标准品（5ul)ApoB抗血清1m(过量)（1∶32～1∶64）孵育一定时间测定吸光度(A340nm)值A吸光度抗原浓度标准曲线2.技术要点（载脂蛋白B的检测）按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线4.方法评价：操作简单、快速、易于自动化；敏感度比单扩高10倍，但比散射比浊低（数量多而大的抗原抗体复合物才适用本方法）；反应时间长(测定的是第二反应阶段)

8、；抗体用量较大。3.影响因素：注意抗原的稀释；标本应避免混浊。代表性仪器：全自动系列化分析仪：olympusAU560,日立7600全自动生化分析仪。特定蛋白分析仪检测前白蛋白、载脂蛋白A、B等。1.原理入射光I0透射光I吸光度A=lgI0/I＝k1bC复合物C复合物＝k2C抗原(抗体过量)二)免疫胶乳比浊法吸光度A＝k3C抗原2.技术要点稀释待检样品和标准品加抗体致敏胶乳溶液孵育一定时间测定吸光度(A340nm