《沉淀反应》PPT课件

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1、指导教师：彭建华宋云边藏丽徐海英实验二沉淀反应（3学时）血清学反应凝集反应沉淀反应√中和反应补体结合反应免疫标记技术免疫学检验主要内容免疫细胞检测TC√BC√NKCMφ√、、、中性粒细胞√酶标记技术√金标记技术√荧光标记技术同位素标记技术其它技术化学发光免疫技术免疫比浊分析技术其它√抗原抗体的总体原理根据抗原抗体的反应有特异性，可用已知抗原测定未知抗体；也可用已知抗体测定未知抗原。抗原抗体反应特点1.特异性2.可逆性3.可见性4.阶段性血清学反应条件1.电解质2.PH3.温度抗人血清？根据抗原抗体反

2、应的方式和特性分为:双向免疫扩散对流免疫电泳单向免疫扩散免疫电泳火箭电泳沉淀反应类型环状沉淀絮状沉淀琼脂扩散荚膜膨胀对流免疫电泳双向琼脂扩散示教：单向琼脂扩散火箭免疫电泳免疫电泳环状沉淀实验内容一、目的掌握对流免疫电泳与双向琼脂扩散的操作步骤，结果观察及实际应用。并在此基础上了解各类琼脂扩散试验的特点。二、原理1.总试验原理：沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在一定条件下发生结合并出现肉眼可见的沉淀物。2.双向免疫扩散试验原理：可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，当扩散到两者浓度比例合适的部位相

3、遇时，即出现乳白色的沉淀线。AgAb用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗体）；抗原或抗体的纯度鉴定；抗原或抗体相对量的估计。1:21:41:81:16双向琼脂扩散的用途双向免疫琼脂扩散孔型○○○○○○○○○○○○○○三孔型双孔型梅花孔型双排孔型双向免疫扩散试验不但可对抗原或抗体进行定性鉴定和测定效价，还可对抗原或抗体进行纯度分析和同时对两种不同来源的抗原或抗体进行比较，分析其所含成分的异同。若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线。因此，利用此法可进行抗原或抗体的

4、纯度分析。沉淀线形成的位置与抗原、抗体浓度有关，抗原浓度越浓，形成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越浓，形成的沉淀线距抗体孔越远，因此，当固定抗体的浓度，稀释抗原，可根据已知浓度的抗原沉淀线的位置，测定未知抗原的浓度；反之固定抗原的浓度，亦可测定抗体的效价。此外观察两个邻近孔的抗原与抗体所形成的两条线是交叉抑或相连，可用来判断该两抗原是否有共同成分。假如同样的纯抗原a放在两个邻近的孔中，对应抗体放在中央孔中，两条沉淀线在其相邻的末端会互相连接和融合；若两个不同的抗原a和b，则两线互相交叉；若两个抗原

5、有部分相同成分a和ab，则两线除有相连部分以外还有一伸出部分。3.对流免疫电泳原理抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，将抗原置于阴极端，由阴极向阳极移动；抗体因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉淀线。特点：简便、快速、短时间出结果，敏感性高于双扩5-10倍。用途：抗原、抗体的测定三、材料人血清（Ag）抗人血清(Ab)PH8.6巴比妥缓冲液生理盐水琼脂粉、玻片打孔器加样器、电泳仪等。四、方法1.配制1%琼脂：称取琼脂0.5g+巴比妥缓冲液50ml对流免疫电泳加热溶

6、解四、方法2.配制琼脂板:倾入3.5~4ml加热琼脂/片3.在琼脂板上打孔：孔径3㎜、抗原、抗体孔间距5㎜，抗原孔间距2㎜。4.加样：(见图样)5.电泳：将琼脂板放入电泳槽、抗体端接阳极，纱布做引桥，电流为3～4mA/㎝（玻片宽度）电泳40—50min。对流免疫电泳琼脂板厚度3mm四、方法1.配制1%琼脂：称取琼脂0.5g+生理盐水50ml双向免疫扩散加热溶解四、方法2.制板：3.5-4.ml加热琼脂/片3.在琼脂上打孔：4.加样：中间加入抗原、周围加稀释的抗体5.放室温24小时看结果双向免疫扩散A

7、bAg1:21:41:81:161:321:64注意：佐剂抗原实验组采用此方法测定血清效价佐剂抗原采用免疫双扩散法检测血清效价（P：10）效价在1:16以上即可决定采血1:2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64稀释AgAb加样量要精确，不能逸出孔外，否则结果不好观察；制板时，玻片要清洁，边缘要整齐;孔距约5mm左右，太远看不到实验现象。五、结果对流免疫电泳双向免疫扩散示教1单向免疫扩散方法：用抗体制板、打孔、加样、单向扩散24小时看结果结果免疫电泳示教2方法：制板、打孔、加样、电泳2小时挖

8、槽、加抗体、双扩散24小时看结果。免疫电泳扩散模式图A1b：白蛋白血浆免疫电泳各区带所含蛋白成分结果火箭电泳抗原示教3方法：抗体琼脂板的制备、加样、电泳。—+结果环状沉淀反应示教4当抗原与相应抗体比例适当时，接触面出现乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。AbAg抗人血清人血清实验报告要求：绘图表示对流免疫电泳、双向琼脂扩散的结果,并予以简单的说明。对流免疫电泳与琼脂双向扩散试验各有何优缺点？如果本试验中没有出现沉淀线考虑有何因素?琼脂扩散有哪些类型？有何用途？六、讨论