《实验三沉淀反应》PPT课件

《《实验三沉淀反应》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验三沉淀反应[实验内容]：1环状沉淀反应（示教）2单向琼脂扩散（示教）3双向琼脂扩散4微量免疫电泳（示教）沉淀反应类型①环状沉淀反应：最早使用的沉淀反应②以琼脂为支架的扩散反应：单扩，双扩③在扩散的基础上加上电泳：火箭电泳；对流免疫电泳；微量免疫电泳一、环状沉淀反应抗人血清抗牛血清待检血稀释液人血稀释液人血稀释液待检血稀释液抗牛血清抗人血清意义：可检测小量的抗原进行法医学上血迹的鉴定及流行病学中昆虫吸血习性的检查。其缺点是对含几个抗原抗体系统的反应缺乏分辨作用。二、琼脂扩散(1)单向琼脂扩散（单扩）意义：用于定量测定人或动物血清中各种Ig

2、(IgD、IgE除外）的含量。不同稀释度的Ag已知Ab(2)双向琼脂扩散已知Ab未知Ag三、扩散的基础上进行电泳优点：提高反应敏感度，缩短反应时间。抗原抗体在电场中能定向移动，既限制了抗原抗体向四周扩散，增加局部反应浓度，又加快泳动速度，从而缩短反应时间（1-2h即可），提高反应敏感度（10倍）。⑴火箭电泳单扩+电泳不同稀释度Ag已知Ab融于琼脂板意义：用于制作不同稀释度αFP含量的标准曲线，测定病人血清中αFP含量。⑵对流免疫电泳双扩+电泳已知Ab未知Ag意义：用于HBsAg、αFP检测及脑膜炎球菌分型检测。Ag接电源负极，Ab接电泳正极

3、⑶微量免疫电泳先电泳后扩散病人血清正常人血清已知Ab意义：用于免疫球蛋白不同成分的鉴定。血清蛋白电泳示意图图7-1电泳和双扩散不同阶段示意图Ⅰ电泳后各蛋白质的位置Ⅱ加抗体后双扩散的情况Ⅲ双扩散结果132654中央孔——αFP诊断血清1，4——阳性对照2——阳性病人血清（原液）3——阳性病人血清（1：10）5——阴性病人血清（原液）6——阴性病人血清（1：10）1[实验内容]：双扩按图示加样操作步骤用蜡笔在一洁净的载玻片中央1/3上划区，并作好标记制备琼脂板：将玻片平放于水泥平台上，用吸管吸足量琼脂，沿划区边缘快速一次性加入，形成厚约3mm的

4、琼脂板，放置1-2分钟使之凝固。（***避免产生气泡、分层及厚薄不均）琼脂板凝固后依模板打孔加样：原则：每孔10ul、加满孔、不含气泡、不溢出，每孔加样量要准确均一微量移液器的使用：各个微量移液器与相应血清一一对应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底。加样完置湿盒过夜后观察结果。注意事项加样前判断孔内的琼脂是否已取出加样时注意不要刮破琼脂以免影响沉淀线形状加样时抗体、阳性血清及待测标本应各用一支加样器，以免混淆，影响实验结果实验报告双扩的实验原理、结果、结果分析附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系Ab表示Ag与Ab的分子量大小适中

5、、浓度适宜表示Ag的浓度大于Ab表示Ab浓度的大于Ag