微生物实验室培养 上课用ppt课件.ppt

《微生物实验室培养 上课用ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养课题背景微生物研究和应用的前提：如何获得纯净培养物？防止杂菌入侵，获得纯净的培养物①合适的营养和环境条件②确保其他微生物无法混入一基础知识1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2.类型：按物理性质划分：按化学成分划分：按用途划分：（一）培养基固体培养基液体培养基有无凝固剂琼脂分离鉴定工业生产（1）按物理性质划分：天然培养基合成培养基化学成分不恒定的天然有机物如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基化学成分完全了解的物质配制而成的培养基如：高氏1号培养

2、基、查氏培养基。用于分类和鉴定（2）按化学成分划分：基础培养基：鉴别培养基：含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来用于鉴别不同类型微生物的培养基选择培养基：（3）按用途划分：※几种选择培养基①加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌②不加氮源的无氮培养基分离固氮菌③不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物3.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白

3、胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源4.配制原则(1)目的明确：(2)营养全面、浓度适宜、比例恰当(3)适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研微生物生长不可缺少的微量有机物如：维生素、氨基酸、碱基等(4)特殊营养：※蛋白胨:动物蛋白初步消化的产物，富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。主要提供氮源和维生素。※牛肉膏：新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而成，含有多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机

4、酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素。（二）无菌技术防止外来杂菌的污染1.哪里需要无菌？2.如何控制无菌？无菌的意义：（1）实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。1.无菌的范围（1）消毒（2）灭菌概念较为温和理化方法杀死部分有害微生物(不包括芽孢和孢子)强烈的理化因素杀死所有的微生物包括芽孢和孢子常用方

5、法①煮沸消毒法②巴氏消毒法③化学药剂消毒法④紫外线消毒法①灼烧消毒法②干热灭菌③高压蒸汽灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿，培养基等2.无菌的方法※芽孢：在某些细菌生长的一定阶段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或柱形的，抗逆性强的休眠体。※孢子：真菌所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞，能直接发育成新个体。接种室内空气、接种箱、超净工作台用紫外线照射30min紫外线消毒实验者的手臂、实验台等酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液化学药剂消毒牛奶等不宜高温消毒灭菌的70～75℃,30min；80℃,15min巴氏消毒日常食

6、物、罐装食品100℃,5～6min煮沸消毒法适用范围条件方法（1）消毒15～30min100kPa，121℃培养基、实验器材高压蒸汽灭菌1～2h干热灭菌箱（160℃～170℃）耐高温需干燥的物品（玻璃器皿等）干热灭菌烧红酒精灯火焰充分燃烧层灼烧接种的工具、试管口、瓶口灼烧灭菌灭菌时间所需条件适用对象灭菌方法灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅（2）灭菌请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手思考微生物实验室培养的基本操作程序

7、1.器具的灭菌2.培养基的配制3.培养基的灭菌4.倒平板5.微生物接种6.恒温箱中培养7.菌种的保存大肠杆菌的纯化培养：（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基二实验操作（二）纯化大肠杆菌1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：加棉塞、

8、包牛皮纸、橡皮筋勒紧（一）制备培养基培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌计算称量溶化调节pH灭菌倒平板（一）制备培养基1.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.