专题2课题1微生物实验室培养ppt课件.ppt

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1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养了解有关微生物及培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：课题背景微生物研究和应用的前提：如何获得纯净培养物？防止杂菌入侵，获得纯净的培养物①提供合适的营养和环境条件②确保其他微生物无法混入一、培养基作用、种类二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌主要内容一基础知识

2、1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2.类型：按物理性质划分：按化学成分划分：按用途划分：（一）培养基固体培养基液体培养基有无凝固剂琼脂分离鉴定工业生产（1）按物理性质划分：天然培养基合成培养基:（2）按化学成分划分：按照需要的成分进行配置。（3）按用途划分：选择培养基:鉴别培养基:加入某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物。加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物。加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:几种选择培养基举例：分离酵母菌

3、、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌3.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源（二）无菌技术防止外来杂菌的污染.1.哪里需要无菌？2.如何控制无菌？无菌的意义：（1）实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）培养的器皿、接种用具和培养

4、基等器具进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。1.无菌的范围消毒:2、无菌技术的种类灭菌:使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。※芽孢：在某些细菌生长的一定阶段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或柱形的，抗逆性强的休眠体。※孢子：真菌所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞，能直接发育成新个体。接种室内空气、接种箱、超净工作

5、台用紫外线照射30min紫外线消毒实验者的手臂、实验台等酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液化学药剂消毒牛奶等不宜高温消毒灭菌的70～75℃,30min；80℃,15min巴氏消毒日常食物、罐装食品100℃,5～6min煮沸消毒法适用范围条件方法（1）消毒15～30min100kPa，121℃培养基、实验器材高压蒸汽灭菌1～2h干热灭菌箱（160℃～170℃）耐高温需干燥的物品（玻璃器皿等）干热灭菌烧红酒精灯火焰充分燃烧层灼烧接种的工具、试管口、瓶口灼烧灭菌灭菌时间所需条件适用对象灭菌方法灼烧灭菌干热灭菌箱高压

6、蒸汽灭菌锅（2）灭菌请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手思考?大肠杆菌的纯化培养：（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基二实验操作（二）纯化大肠杆菌1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热

7、溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：加棉塞、包牛皮纸、橡皮筋勒紧（一）制备培养基培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌阅读课本P17，思考与讨论倒平板操作后面的四个问题。计算称量溶化调节pH灭菌倒平板（一）制备培养基1.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立即盖上

8、皿盖。4.等待平板冷却凝固（约需5～10min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与