革兰染色标准操作程序.doc

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1、革兰染色标准操作程序【操作规程】1、涂片取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴待检样品，无菌状态下将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。2、干燥涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高出微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。3、固定固定常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处层尽快地来回通过2～3次，共2～3s，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉烫为宜（不超过60度），放置待冷后，进行染色。4、初染在涂片薄膜上滴加龙胆紫1～2滴使染色液

2、覆盖涂片，染色约10s。5、水洗斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。6、媒染在涂片薄膜上滴加碘溶液，使染色液覆盖图片，染色约10s。7、水洗斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。8、脱色斜置载玻片，滴加脱色液脱色，至流出的脱色液不显紫色为止，需时20～30s，随即水洗。1、复染在涂片薄膜上滴加沙黄染液1～2滴，使染色液覆盖涂片，染色10s。2、水洗斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。3、干燥、观察用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后加一滴侵油在玻片

3、上，用油镜观察细菌的形态及染色，紫色的是革兰阳性菌，红色的是革兰阴性菌。【注意事项】革兰染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为革兰阴性菌，如脱色时间过短，革兰阴性菌也可被脱色而被误认为革兰阳性菌。因此必须把握脱色时间。革兰染色检验记录记录编号：样本编码送样日期染色液厂家染色液批号镜检结果□革兰阳性菌□革兰阴性菌□革兰阳性菌+革兰阴性菌□未发现革兰阴性菌或阳性菌检验结论□合格□不合格检验人检验日期复核人复核日期