细菌的简单染色和革兰染色实验报告

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1、细菌的简单染色和革兰染色实验报告生32程雨嬪2013012406一、实验目的1、学习无菌操作技术，掌握细菌涂片的制备方法。2、巩固显微镜油镜的使用方法。3、裳握细菌简单染色法和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。二、实验原理细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电荷的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。简单染色法就是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法。革兰氏染色法（Gr

2、amStaining）由丹麦病理学家ChristianGram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别分类为革兰氏阳性菌（GJ和革兰氏阴性菌（G）这两种类型，是细菌学屮最常用的鉴别性染色法。革兰氏染色法之所以能够将细菌区分为革兰氏阳性菌（G‘）和革兰氏阴性菌（G）两大类，是因为这两类菌的细胞壁结构和成分不同。一般认为革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色，再经帑红复染就

3、染成了红色；革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色。除此之外,革兰染色的差异还应考虑物理结构的不同，例如酵母菌虽然是不是细菌,既不是革兰氏阴性菌，也不是革兰氏阳性菌，但具有革兰染色阳性反应。三、实验器材1、菌种：大肠杆菌、枯草芽也杆菌、葡萄球菌、酵母菌、待鉴定的未知菌S1和S2。2、仪器及其他用品：显微镜、酒精灯、打火机、接种环、载玻片、盖玻片、擦镜纸、擦镜液、吸水纸、镜油、无菌牙签。3、简单染液：结晶紫染液、帝红染液。4、革兰染液：结晶紫染液、革氏碘液

4、、95%乙醇溶液、番红染液四、实验步骤（一）简单染色1、载玻片的处理：从乙醇溶液中取出洗干净的载玻片，用吸水纸擦干，将要涂菌的部位在酒精灯火焰上烤一下，可以去除油脂，冷却待用。2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上灼烧待冷却后，用接种环从试管枯草芽抱杆菌培养液中取一环菌，于载玻片中央涂一直径约0.5-lcm的均匀薄层（可以事先在背面做好标记圆圈），或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一均匀薄层。取菌时应在酒精灯火焰外焰附近操作，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。3、干燥

5、：涂片后室温下自然干燥。4、固定：手持载玻片--端使标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动2~3次，要求玻片温度不超过60°C,以玻片背面触及手背皮肤觉得较热即将感觉到烫为宜，放置待冷后染色。固定的忖的是杀死微生物，固定其细胞结构，保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉。5、染色：在固定好的涂片标记处滴加1滴结晶紫染液，染色Imino6、水洗：缓慢冲洗染液，吸干。7、镜检：观察两个标本，区分辨別染成的紫色和红色。8、将枯草芽抱杆菌改为平板上的大肠杆菌，重复以上步骤（二）革兰染色1、制片：分别取大肠杆菌、枯草芽

6、抱杆菌、葡萄球菌、酵母菌、未知菌S1制成涂片，干燥，固定。2、初染：滴加1滴结晶紫染液，染色lmin,水洗，吸干。3、媒染：再加1滴碘液覆盖涂片lmin,水洗。4、脱色：用吸水纸吸去载玻片上的残留水，滴加95%的乙醇脱色，轻轻摇动玻片直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。5、复染：滴番红染液复染3min,水洗。6、镜检：吸去多余的水后，盖上盖玻片观察标本，观察时注意细菌形态、大小、排列和颜色。（三）选做实验在干净的载波片上滴加半滴水，用无菌牙签取一点牙垢，涂抹在水滴上，制成涂片后，进行革兰氏染色后观察。五、实验结果与讨论1、革兰

7、染色照片结果（1）枯草杆菌图1枯草杆菌革兰氏染色结果，10x100如上图所示，枯草杆菌染色结果为紫色，是革兰氏阳性菌（GJ。（2）酵母菌图2酵母菌革兰氏染色结果1,10x100如上图所示，酵母菌染色结果为紫色，是革兰氏阳性菌（㈡）。注：样品为酵母菌液，背景中可见大肠杆菌污染图3酵母菌革兰氏染色结果2,10X100如上图所示，酵母菌染色结果为紫色，是革兰氏阳性菌（G+）。注：样品为固体平板上的酵母菌（3）金黄色葡萄球菌图4金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果,10x100如上图所示，金黄色葡萄球菌染色结果为紫色，是革兰氏阳性菌（GJ。

8、注：从图中可以观察到葡萄球状的细菌聚集状态。图5大肠杆菌革兰氏染色结果,10x100如上图所示，大肠杆菌染色结果为红色，是革兰氏阴性菌（G）。(5)未知菌液SI图6未知菌液S1涂片革兰氏染色结果,10x100如上图所示，未知菌的染色结果为紫色，是革兰氏阳性菌(GJ,由细菌形态推测为一种球菌