革兰染色法、细菌的特殊染色法

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1、实验一革兰染色法、细菌的特殊染色法微生物学与细胞生物学教研室实验目的掌握细菌革兰染色的原理与方法掌握细菌芽孢染色的基本原理与方法熟悉普通光学显微镜的油镜使用与保养实验原理革兰染色法的简介革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。由丹麦医师ChristianGram创立。方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）后，用脱色剂（乙醇和丙酮）脱色，再用复染剂染色。实验原理革兰染色法的原理一般认为革兰阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量高，且交联度大，脂类含量少，经95%乙醇脱色时，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，与细胞结合的结晶紫与碘的

2、复合物不容易被脱掉，因此细胞仍保留初染时的颜色。而革兰阴性菌的细胞壁较薄，脂类含量较高，肽聚糖含量较低，乙醇脱色时溶解外层类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经复染之后，又染上了复染的颜色。实验原理芽孢染色法的原理芽孢具有厚而致密的壁，折光性强，通透性低，不易着色，用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。芽孢染色法都基于同一个原则，即除了使用着色力强的染料外，还需要加热或延长染色时间等，促进标本着色。然后使菌体脱色而芽孢上的染料仍然保留。经复染之后，菌体和芽孢呈不同的颜色。实验材料-菌株金黄色葡萄球菌（209

3、P）18-20h斜面大肠杆菌18-20h斜面枯草芽孢杆菌20-24h斜面实验材料-试剂蒸馏水结晶紫卢戈碘液95%乙醇番红花红孔雀绿实验步骤革兰染色法涂片干燥固定初染（结晶紫1分钟）水洗媒染（碘液1分钟内换2-3次）水洗脱色（95%乙醇20-30秒）水洗复染（番红花红5分钟）水洗吸水纸吸干镜检实验步骤芽孢染色法涂片干燥固定初染（孔雀绿20分钟）水洗复染（番红花红5分钟）水洗吸水纸吸干镜检实验结果实验结果其它项目预习酵母菌和霉菌的形态观察讨论革兰染色法中关键步骤是哪一步？为什么？为什么芽孢和菌体会被染成不同的颜色？