实验三 革兰染色法.ppt

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1、实验三革兰染色法实验目的和要求1.理解革兰染色法的原理；2.掌握细菌涂片的制作；3.掌握革兰染色的方法以及意义；细菌形态检查方法1.不染色标本检查法2.染色标本检查法（一）不染色标本检查应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法压滴法载玻片细菌悬液盖玻片悬滴法镜检观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。（二）染色标本检查法细菌体积小、半透明，经染色后才能观察清楚。染色法是染色剂与细菌细胞质结合。最常用的染色剂是盐类。碱性染色剂是由有色的阳离子和无色的阴离子组成；酸性染色剂则相反。细菌细胞质富含核酸，可以与带正电

2、荷的碱性染色剂结合；酸性染料不能使菌体染色，而使背景着色而形成反差，故称负染。染色标本的检查法负染色法正染色法细菌染色的方法单染法:采用一种染料染色,只能观察细菌的形态和排列特征，不能观察细菌的染色特性和进行鉴别。复染法（鉴别染色法）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。革兰染色法该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的，至今仍广泛应用。革兰染色法的原理★渗透学说：与肽聚糖结构有关。革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细

3、胞壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶紫碘复合物脱出。★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的复合物，不易被酒精脱出。★等电点学说：与细菌所带电荷有关。革兰阳性菌等电点低（pI）为2~3，在中性或碱性环境中所带负电荷多；革兰阳性菌pI为4~5，所带负电荷少，影响结合染色的多少。实验材料与方法（一）材料:菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物染液：结晶紫染液、卢戈碘液95%酒清、稀释复红其他：玻片、接种环、酒精灯无菌生理盐水、显微镜等（二）方法：细菌涂片的制作：涂片

4、、干燥、固定革兰染色：初染、媒染、脱色、复染油镜使用：观察染色结果并记录染色标本检查的基本程序涂片－→干燥－→固定－→染色★涂片：接种环灭菌、平板取材、细菌涂布★干燥：自然干燥、热空气干燥★固定：通过火焰外焰三次★染色：初染、媒染、脱色、复染细菌涂片的制作涂片干燥固定染色镜检革兰染色法（Gram染色）染液组成：结晶紫染液、卢戈碘液95％乙醇、稀释复红染色方法：结晶紫初染卢戈碘液媒染95％乙醇脱色稀释复红复染1分钟1分钟影响革兰染色的关键步骤是脱色水洗水洗水洗水洗干燥30S～1minProceduresofGramStaining初染媒染脱色复染结

5、晶紫1分钟卢戈氏碘液1分钟95%酒精30秒稀释复红30秒革兰染色结果紫色－－革兰阳性菌红色－－革兰阴性菌革兰染色意义★有助于鉴别细菌★有助于选择用药★有助于了解细菌的致病性影响革兰染色的因素1.操作因素★涂片的厚薄★脱色时间的长短2.染液因素★卢戈碘液放置时间过长★95％乙醇挥发★结晶紫与草酸铵混合时间太长3.细菌因素：★细菌种类★细菌菌龄