固定化青霉素酰化酶（IPA-750）企业标准.doc

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1、Q/ABVK湖南福来格生物技术有限公司发布1998-10-10实施2008-10-10修订固定化青霉素酰化酶（IPA-750）Q/ABVK001—2008湖南福来格生物技术有限公司企业标准前言本标准依据GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》编写。本标准化由湖南福来格生物技术有限公司提出。本标准化由湖南福来格生物技术有限公司起草。本标准主要起草人：曾红宇、柳杏辉。本标准1998年10月制定并实施，于2003年10月第一次修订，2008年10月第二次修订，现用标准为200

2、8年修订版。固定化青霉素酰化酶（IPA-750）1范围本标准规定了固定化青霉素酰化酶(IPA-750)的技术要求，试验方法，检验规则、包装、运输、贮存。本标准适应于β-内酰胺类抗生素生产6-氨基青霉烷酸（6-Aminopenicillanicacid）、7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸（7-Aminodeacetoxylcephlosporanicacid）和其他相关产品的生物催化剂（酶）。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘

3、误的内容）或修订版均不适用于本标准，但鼓励根据本标准达成协议的各方研究使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。QB/T1803-1993工业酶制剂通用试验方法QB/T1804-1993工业制剂通用检验规则和标志QB/T1805.3-1993工业用蛋白酶制剂国家技术监督局172号（1997）《产品标识标注规定》国家技术监督局令第43号（1995）《定量包装商品计量监督规定》中国药典2005年版二部。3定义固定化青霉素酰化酶即本标准中的固定化青霉素酰化酶（IPA-750）。

4、4技术要求4.1理化指标4.1.1外观：本品为白色或浅黄色球形颗粒、无臭4.1.2粒径(≥100μm)：≥95%4.1.3活力(28℃、湿品)：≥100u/g4.1.4ß-内酰胺酶：不得检出(开环值≤0.5ml)4.2净含量偏差应符合《定量包装商品计量监督管理办法》规定5检验方法检测样品的准备不含保护溶液的成品酶：直接取样品进行检测。含保护溶液的成品酶:取样品约30g，置50～100ml的2#砂芯漏斗中，用去离子水洗涤三次，抽干至无水滴流出后备用（若暂不进行检测应用干净干燥的容器密封保存以防水份蒸发）

5、。5.1外观检测取本品1g置透明玻璃容器中，室内自然光下目测。5.2粒径检测取样品少量，在微钠粒度仪（winner99）下，按《微钠粒度仪（winner99）操作规程》对样品进行检测。5.3活力(28℃、湿品)检测5.3.1原理青霉素(PenG)在固定化青霉素酰化酶（IPA-750）作用下转化成6-APA和苯乙酸，用NaOH滴定苯乙酸，根据NaOH的消耗量计算固定化青霉素酰化酶（IPA-750）的活力。5.3.2酶活力定义在一定反应条件下，每克固定化青霉素酰化酶（IPA-750）每分钟转化PenG生成

6、6-APA的微摩尔数。5.3.3溶液配制（1）0.02mol/L、pH7.8的磷酸盐缓冲液称取4.76gK2HPO4·3H2O、0.55gKH2PO4溶解于950ml去离子水中，用K2HPO4·3H2O调pH至7.8（若pH高于7.8则用KH2PO4调节），再用去离子水定容至1000ml。（2）10%青霉素钾溶液称取青霉素钾盐20.00g，用0.02mol/L、pH7.8的磷酸盐缓冲液溶解（加150ml左右），再定容至200ml，溶液现配现用。（3）0.1mol/LNaOH（参照中华人民共和国药典）5

7、.3.4仪器自动滴定装置（浆式搅拌，恒温，pH自动滴定仪）。5.3.5检测精确称取样品200～300mg于50ml的烧杯中，加入预热到28℃的30～40ml10%的青霉素钾溶液，开启搅拌，控制反应温度28℃，反应中用0.1mol/LNaOH溶液调pH至8.0，控制反应pH8.0，记录约10分钟左右NaOH的消耗体积（ml）。5.3.6活力(28℃、湿品)计算VNaOH（ml）×CNaOH（mol/L）×1000活力(28℃、湿品)=──────────────────（u/g）W（g）×T（min）V

8、NaOH：滴定中消耗的NaOH体积（ml）CNaOH：NaOH溶液的摩尔浓度（mol/L）W：样品的重量（g）T：滴定时间（min）5.4ß-内酰胺酶检测5.4.1溶液配制（1）磷酸盐缓冲液（pH7.0）取磷酸氢二钾48.2g与磷酸二氢钾15.7g，加去离子水至5000ml。（2）6-APA溶液配制称取0.627g6-APA，用100ml磷酸盐缓冲液（pH7.0）溶解。（3）醋酸钠缓冲液（pH4.5）取冰醋酸69.3ml，加水至1250ml,另取结晶醋酸