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1、食品中菌落总数的测定实验食品中菌落总数的测定实验一、实验目的:了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法与混合平板培养法,认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法就是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但就是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中的
2、多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位(colony-formingunits,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点就是操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素的影响,但就是这种计数方法最大的优点就是可以获得活菌的信息,所以被广泛用于生物制品检验,以及食品、饮料与水等含菌指数或污染度的检测三、试剂与材料1、仪器恒温培养箱:(36℃±1℃,30℃±1℃。)均质器或振荡器食品中菌落总数的测定实验无菌吸管:
3、1ml(0、01ml刻度)、10ml(0、1ml刻度)或微量移液器及吸头无菌锥形瓶:容量250ml、500ml、无菌培养皿:直径90mm菌落计数器2、样品1)平板计数琼脂(platecountagar,PCA)培养基:蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000ml、pH7、0±0、2。将所有成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。分装试管或锥形瓶,121℃高压灭菌15min。注:用平板计数琼脂,称取23、5g于1000ml蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,121℃高压灭菌20mi
4、n,冷却至45~47℃左右备用。2)无菌生理盐水:氯化钠(NaCl)5、875g蒸馏水(纯净水)500ml称取5、875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中,121℃高压灭菌20min。3、器材100ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、操作及实验步骤1、样品的稀释:25g(ml)样品+225ml稀释液,均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次,换用1次1ml无菌吸管或吸头。(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液,各取1ml分别加入无菌培养皿内。吸取1
5、ml空白稀释液作空白对照。每皿中加入15ml～20ml平板计数琼脂培养基,并转动平皿使其混合均匀。食品中菌落总数的测定实验2、培养:待琼脂凝固后,将平板翻转,36±1℃培养48h±2h。水产品30±1℃培养72h±3h。(如果有弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4ml),凝固后翻转平板。)3、菌落计数:记录稀释倍数与相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。五、计算公式:式中:N——样品中菌落数;∑C——平板(含适宜范围菌落数的平板
6、)菌落数之与;n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;d——稀释因子(第一稀释度)。六、实验数据:-1-2103101空白00NaCl水-1-2100101琼脂0
