实验食品中菌落总数的测定讲义1

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1、实验一食品中菌落总数的测定2012.4—、相关标准描述：1、GB/T5410-2008《乳粉》中规定菌落总数测定应符合GB19644的规定2、GB19644-2005《乳粉卫生标准》中规定①菌落总数/（cfu/g）W5X10）②指标按照GB/T4789.18规定方法检验3、GB/T4789.18-2003《食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验》中规定：©5.2检样的处理5.2.4乳粉：袋装奶粉应用75%酒粘的棉球涂擦消毒袋口，以无菌手续开封取样，称取检样25g,放入装有适量玻璃珠的灭菌锥形瓶内，以225mL温热的灭菌牛理盐水徐徐加入（先川少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全

2、部加入，以免乳粉结块），振摇使充分溶解和混匀。②6检验方法——菌落总数测定：按GB/T4789.2执行4、菌落总数测定方法参照GB/T4789.2-2003/2008/2010二、实验口的：1、掌握食品微生物检测实验的培养基制备及灭菌技术；2、掌握食品微生物检测所需玻璃器皿的灭菌技术；3、学习乳粉微生物检测屮活菌计数的方法；4、掌握稀释、倾注平板操作技术。三、实验材料：培养基：由1、2、3、4组做全班用培养基各lOOOmL,过滤，标记，置于公用操作台，备各组同学分装。营养琼脂培养基成分：蛋白腺10g；牛肉膏3g；氯化钠5g；琼脂15g~20g；蒸饰水lOOOmL制法：

3、将除琼脂外的各成分溶解于蒸馆水内，加入15%氢氧化钠溶液约3mL校正pH至7.2〜7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121°C高压灭菌15mino本次试验每组取制备好的约150mL培养基（倒15mL每个平板，共8个，包括6个检样+2个空白对照）于250niL锥形瓶中即可。（一）仪器设备：冰箱：制备完的培养基放置冰箱内保存；超净工作台；电热烘箱：保温箱：36±1°C；恒温水浴锅：46±1°C；托盘天平：感量0.lg；灭菌锅:12VC；铁架台（带铁圈）一组；电炉（带石棉网）一个（二）试剂：ImoL/LNaOH：40gNaOH溶TlOOOmL蒸憎水中。由实验

4、员老师配制，总计500mL（分装入lOOmL试剂瓶6瓶），标记，配好滴管。每2组发1个。lmoL/LHCl：移取浓盐酸90mL,川蒸馅水稀禅至lOOOmL。由实验员老师配制，总计500mL（分装入100mL试剂瓶6瓶），标记，配好滴管。每2组发1个。0.85%的生理盐水：&5g氯化钠加入到1OOOmL蒸懈水中。由第5、6、7、8、9组分别用容量瓶配制lOOOmL,标记，置于公用操作台，备各组取用。旁边请放置250mL吸取225mL/122.5mL和10mL十燥量筒/吸量管/移液管吸取9mL牛理盐水用，各2支。各组分别取225mL/122.5mL于500mL7250mL

5、锥形瓶中，取9mL于5支试管中。消毒酒精：75%酒精溶液+棉球。lOOOmL,由第10、11、12、13、14组分装250mL试剂瓶，各2瓶，标记。置于超净工作台里或分发各组。（三）其他：样站：乳粉；精密pH试纸（5-9）-本；玻璃棒I支；烧杯（50mLl个称量样品，需灭菌）；锥形瓶250mL2个（一个盛装培养棊并湿热灭菌，一•个留作样品处理内装数个玻璃珠及牛理盐水湿热灭菌备用/500ml的锥形瓶）；ImL吸管（洗净烘干，内置l~1.5cm长的细棉塞，打火机烧掉尾丝，灭菌）5只（3~4只稀释并吸稀释液，1只备用）；培养IIIL90mm8套（洗净，灭菌，6只培养检样，2

6、只空口对照）；试管每组5支（3支装样品，2支空口稀释液）；载玻片1个（称量牛肉膏）；剪子/刀片1把（灭菌取样用）。四、实验方法及步骤：检验程序参见新版GB。1、实验准备阶段（第一次实验）①容器的准备：每组按清单准备好所有需要清洗的仪器。以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为标准。玻璃器皿清单:序号名称规格数量备注1试管18mmX180mm52支备用2吸管ImL52支备用3培养皿90mm84不锈钢试管帽52支备用5锥形瓶250mL21只内置玻璃珠+生理盐水或500mL的锥形瓶1只分装培养基6载玻片17玻璃棒18烧杯5()mL1样品称量9蹑子1取消毒棉或取样用，需灭菌1

7、0接种针12塞棉条入吸管11剪了/刀片1取样川，需灭菌12量筒lOmL2洗净，全班4支250mL72组1支+全班2支13容量瓶1000mL5全班用5个，生理盐水14带刻度搪瓷烧杯1000mL4全班使用4个，培养基15试剂瓶250mL(加盖)10盛装75%酒楮，全班100mL12带胶头滴管HC1;NaOH其他物品清单序号名称规格数量备注1报纸/牛皮纸张32棉花3称量纸4棉绳L5酒精灯16电炉1带石棉网7火柴/打火机18水浴锅19精密pH试纸本6每2组1本10消毒棉花②容器的清洗、烘T、包扎及灭菌清洗：一般玻璃器皿用去污粉、洗衣粉或肥皂水擦洗，再用口来水