高效液相色谱法简介ppt课件.ppt

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1、高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatographyHPLC）2021/7/271．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%一、HPLC与GC的比较主要差别：分析对象的差别和流动相的差别2021/7/272．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动

2、相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性2021/7/27(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。2021/7/27四、影响色谱峰扩展及色谱分离的因素1.涡流扩散项HeHe＝2λdp参数气体液体扩散系数Dm/cm2.s-1密度ρ/g.cm-3粘度η/g(cm.s)-110-11

3、0-510-3110-410-22021/7/27第一节高效液相色谱仪2021/7/27液相色谱仪（2）2021/7/27液相色谱仪（3）2021/7/27液相色谱仪（4）2021/7/272021/7/27流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC1.流程2021/7/272.主要部件高压输液系统：一般由贮液器、高压泵、脱气、梯度洗脱装置高压泵为主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具

4、有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2021/7/27(2)进样装置流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：2021/7/27(3)高效分离柱色谱柱是高效液相色谱仪的心脏，要求分离度高、柱容量大、分析速度快，高性能的色谱柱与固定相本身性能、柱结构、装填和使用技术有关。柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。标准柱型：内径4.6或3.9mm，长度为15-30cm不锈钢柱，填料5-10mm，柱效7000-10000塔板数。2021/7/27(4)检测系统a.紫外检测器

5、应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。2021/7/27b.光电二极管阵列检测器(PDAD,photodiodearraydetector)紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，能快速同时检测从200～900nm范围的全谱信息。计算机快速处理，三维立体谱图。2021/7/27c.示差折光检测器（differentialrefractiveindexdetector）除紫外检测器之外应用最多

6、的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；特点：通用型检测器；灵敏度低；对温度敏感；不能用于梯度洗脱2021/7/27示差折光检测器2021/7/27d.荧光检测器（fluorescencedetector）特点：选择性检测器；高灵敏度、高选择性；适用对象：对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；2021/7/27通用型检测器，用于检测挥发性低于流动相的任何样品。可用于梯度洗脱对温度变化不敏感f.蒸发激光光散射检测器（ELSD,EvaporationLaserscatter

7、detector）2021/7/27质谱检测器（massspectroscopy）h.电化学检测器：电导检测器、安培检测器等2021/7/27（一）、液-固吸附色谱固定相：固体吸附剂，如极性的硅胶和氧化铝，非极性的苯乙烯-二乙烯苯基共聚物和石墨化炭黑微球，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；第三节、高效液相色谱法的主要类型选择2021/7/271.环境中有机

8、氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37～50m)