急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义.pdf

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1、244细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015L．3l(2·论著·文章编号：1007—8738(2015)02—0244—04急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义蒋茜，许铖铖，刘红利，牟笑，毛朝明’(江苏大学附属医院：检验科，核医学科，江苏镇江212001)[摘要]目的通过检测急性髓细胞白血病患者外周血各淋巴细胞亚群的分布，探讨该类患者免疫功能状况。方法通过流式细胞术检测健康对照组(／'b=20)、急性髓细胞白血病初发患者(／7,=31)及完全缓解期患者(n=31)外周血中CD4T细胞、CD8T细胞、TCR~／8T细胞、CIMCD25调节性T细

2、胞(Treg)、CD16CD56NK细胞比例；通过细胞杀伤实验分析NK细胞和-／ST细胞的杀伤活性以及与Treg的关系。结果与对照组相比，初发白血病患者和完全缓解患者外周血中CD4T细胞、CD8T细胞比例无明显差异，但CD4CD25Treg比例明显增高，TCR~8T细胞和CDI6CD56NK细胞比例明显下降。初发病患者NK细胞和8T细胞具有杀伤活性，但Treg能明显抑制其杀伤活性。结论急性髓细胞白血病患者外周血8T和NK细胞虽具有杀伤功能，但比例明显下降，Treg对其杀伤功能具有抑制作用。[关键词]白血病；8T细胞；NK细胞；调节性T细胞；免疫抑制[中图分类号]R593．2，11730．3，

3、R392．11[文献标志码]A白血病是发生在造血组织的一组高度异质性的体购自BeckmanCoulter公司。乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂恶性血液病，确切病因至今未明，病毒感染、遗传因盒购自碧云天生物技术研究所。CIMCD25调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)、CD16CD56NK细胞和TCR-y8T素、放射、化学毒物或药物等因素和白血病发病有细胞分离试剂盒购自MihenyiBiotec公司。AML细胞株NtM关。正常情况下，机体免疫细胞能清除突变的肿瘤由本实验室保存。细胞，维护机体的正常生理功能，免疫功能的异常则1．2方法有利于白血病的发生、发展。然而，白血病病理条件1

4、．2．1流式细胞仪分析采集研究对象外周静脉血1mL或下的机体免疫细胞数量及功能状态并不十分清楚。骨髓标本0．5mL，肝素抗凝，Ficoll液离心分离单个核细胞。为了解白血病中的免疫功能背景，本研究以急性髓取1×10细胞／100tzL，分别加入相应的荧光团标记的单克细胞白血病(acutemyeloidleukemia，AML)患者为研隆抗体5L，同时设同型对照，4~C避光反应30min，2mL的5LFBS的PBS液洗涤1次，300g离心5min，弃上清，究对象，对治疗前后外周血淋巴细胞亚群的数量进l0L多聚甲醛PBS液400重悬细胞，流式细胞仪(BD公行评价，以分析白血病及治疗前后对机体免疫状

5、态司)检测细胞总数1万个，通过Flowjo软件分析数据，计算各的影响。淋巴细胞的百分率。1．2．2细胞分离和纯化取完全缓解期白血病患者肝素抗1材料和方法凝外周血，用FicoU液分离外周血单个核细胞。根据细胞分1．1材料离试剂盒操作说明书，通过阳性选择法从单个核细胞中分离选自2012—05／2013—12期间江苏大学附属医院血液科住获得NK细胞或8T细胞；滤出液进一步通过阴性选择法获院治疗的AML患者31例，均经形态学、细胞遗传学和免疫表得CD4T细胞，再用CD25细胞分离试剂盒通过阳性选择获得型证实，其中男19例，女l2例，平均年龄52．324-14．59岁。CD4CIY25Treg。经流式

6、细胞仪检测，CIMCD25Treg的纯度病例被分成初发组和完全缓解组。选择本院健康体检者20名>90％，CD16CD56NK细胞和TCR-／8T细胞纯度>95％。作对照，男1O例，女10例，平均年龄47．68±12．15岁。该研1．2．3细胞杀伤和抑制实验在96孔板中加入分离纯化的究已经江苏大学附属医院伦理学委员会批准并获得患者知情效应细胞(NK细胞或-／ST细胞)5×10与1×10靶细胞同意。Fieoll单个核细胞分离液购自FreseniusKabiNorgeAS(NB4)，然后根据Treg与效应细胞比例(0：1；0．5：1；1：1)分公司。荧光团标记的抗体CD3-APC(UCHT1)、别

7、加入相应数量分离的Treg，共培养6h后收获上清液，根据CD4一兀TC(13B8．2)、CD8一PE(B9．11)、CIY25一PE(B1．49．9)、乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒说明书检测效应细胞杀伤靶CD45一APC(J33)、CD16一PE(3G8)、CD56一PE(N901)、pan细胞的能力。杀伤率=(A处理样品一A对孔)／(A细胞最大酶性一TCR~8-PC5(IMMU510)、V8一FITC(IM