丙型肝炎实验室诊断技术研究进展-论文.pdf

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1、山西医药杂志2013年1o月第42卷第10期下半月ShahxiMed!!!：!．!璺!!·1123·述·丙型肝炎实验室诊断技术研究进展中国人民解放军第252医院(071000)殷丽丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的主1．4重组免疫印迹实验(RIBA)：是利用基因重组技术和要经血液传播的疾病，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细包被技术将HCV不同重组抗原片段包被于醋酸纤维薄膜胞肝癌，目前尚无有效疫苗，亦无有效治愈方法。据世界卫条带的不同位置，待测样本中抗一HCV与之结合后产生色生组织统计，全球HCV的感染率约为3，每年新发HCV带。第一代RIBA试剂含有C100—3

2、、5-1．1两种抗原(包括病例约315万例]，而高度慢性化是该病的最大特征。据sOD序列)，与ELISA相比特异性明显提高，但灵敏度降报道慢性丙型肝炎患者1O年内约有2O发展为肝硬化，肝低；第二代RIBA试剂在第一代基础上增加了3个重组多硬化患者每年约3发展为肝细胞癌，严重威胁着人类的健肽，灵敏度和特异性均有较大提高，是抗一HCV确证的金标康0]。因此，控制HCV感染的形势十分严峻，而早发现、早准；第三代mBA在第二代基础上增加了NS5区抗原，可用诊断和早治疗是防控HCV传染源、阻断传播途径最为有效于对第二代RIBA结果不确定标本的确证。RIBA试剂可的手段。现将HCV感染

3、实验室诊断进展综述如下。以分别对HCV病毒的核心抗体、NS3、NS4、NS5抗体进行1血清学检测(抗一HCV检测)检测，提高了HCV抗体检测的特异性，但R1BA试验在高1．1酶联免疫吸附实验(ELIsA)：ELIsA基本原理是将具危人群(如长期血液透析患者)中的敏感性也只有78．8，有催化活性的酶类通过化学方法和HCV抗原结合为酶标并且由于其操作繁琐，结果无量化且成本高昂，限制了其临记物，后者同时具有免疫学反应性和化学反应性，其与待测床应用]。样本中抗HCV结合后可降解底物并呈现出颜色反应。2HCV抗原检测HCV抗体检测试剂已从第一代发展到第三代，目前国内临2．1肝组织中H

4、CV病毒抗原：以单克隆抗一HCV-NS3直床诊断和采供血机构采用的基本上都是第三代诊断试剂，接酶标法对石蜡包埋肝组织中HCAg-NS3进行测定，该抗其在第二代试剂的基础上增加了非结构区NS3区C33C抗体系应用基因重组表达丙肝抗原(HCv_NS3区一C33一C)免原的比例，且采用基因重组技术、抗原纯度和活性提高，灵疫小鼠并通过细胞融合术后获得。具有简便、快速、稳定、敏性、特异性均有较大提高。对HCV感染诊断的特异性和特异性和敏感性良好、图像清晰等优点，而且不需特殊仪器敏感性均在99以上[3]。输血后感染HCV到能检测出抗设备_6]，但做肝脏穿刺对患者有一定损伤，较难推广。H

5、CV的窗口期由第一代试剂的16周缩短至8周。抗2．2血液中HCV核心抗原(HCV-cAg)：HCV-cAg是HCV检测有时出现假阴性和假阳性，假阳性主要发生于HCV基因编码的结构蛋白之一，其中21～61位氨基酸区HCV感染低流行区，假阴性主要出现于一些免疫缺陷人域是高度保守免疫活性多肤HCV-cAg是在HCV感染者群，比如人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者、器官移植后患体内最早出现的血清标志物，几乎与HCV-RNA同时出者、长期血液透析患者。抗HCV阳性检测不能区分HCV现r7]。目前已有2种检测HCV-cAg的双抗体夹心法是否现行感染。ELISA试剂，1种是在抗体产生之前直

6、接检测血清中HCV1．2胶体金法(PA)：在免疫渗滤技术基础上建立的一种游离核心抗原[8j，另1种是在窗口期和抗体产生后的病毒简易快速免疫学检测技术。将HCV重组抗原固定包被在复制期检测总HCV—cAg。后者不受检测样品中抗HCV抗硝酸原理是将胶体金结合HCV重组抗原固相于玻璃纤维体的干扰，检测结果准确可靠，可用于HCV血清学转换前上，待测样本中抗-HCV与之反应形成复合物，后者向上移的早期急性丙型肝炎的诊断『9。动被固定于硝酸纤维素膜上的HCV抗原捕获，形成一条阳这项检测技术窗口期短，敏感性好，特异性高，操作简性色带，15rain即可判断结果。该方法操作简单、无需特殊便、

7、快速。不需要特殊的仪器，费用低廉，能达到早期诊断实验条件及仪器设备，灵敏度及特异性均较高，对丙型肝炎的目的_1。的早期发现及预防控制有重要参考价值_4]。3HCVRNA检测1．3化学发光法：检测原理：反应时样本中存在的抗一HCV3．1HCVRNA定性检测：对抗一HCV阳性的HCV持续抗体结合到HCV抗原包被的顺磁微粒子，洗涤后加入丫啶感染者，需要通过HCVRNA定性试验确证。目前定性检酯标记的抗人IgG的结合物反应。再次洗涤之后，反应体测主要采用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和转录介导的系中加入触发液使丫啶酯