培氟沙星抗体的制备.doc

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1、培氟沙星抗体的制备　　摘要：为了制备培氟沙星(PFLX)抗体，采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将培氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联，制备免疫抗原PFLX-BSA和检测抗原PFLX-OVA，用PFLX-BSA免疫小鼠以获得高效价的抗体。结果显示，免疫抗原PFLX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性，其最大吸收峰在277.5nm处，说明载体蛋白BSA与PFLX成功偶联，可用于动物免疫。检测抗原PFLX-OVA最大吸收峰在275nm处，说明载体蛋白OVA与PFLX成功偶联，可用作检测抗原进行包被。间接EL

2、ISA检测结果表明，所得小鼠抗血清效价较高，均达1∶32000以上，说明有特异性抗体产生。该研究成功制备了抗培氟沙星抗体，也进一步证明药物偶联成功。　　关键词：培氟沙星；免疫；多克隆抗体　　中图分类号：R978.1文献标识码：A文章编号：0439－８11406－1222-03　　　　ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＭｕｌｔｉｃｌｏｎｅＡｎｔｉｂｏｄｙｏｆＰＦＬＸ　　ＬＩＡＮＧＳｈｕ－ｚｈｅｎ，ＳＵＮＸｉｕ－ｍｅｉ，ＷＥＩＤｏｎｇ，ＧＵＯＹａｎ－ｃｈｕｎ　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｐｒｏｄｕｃｅｍｕｌｔｉｃｌｏｎｅａｎｔｉｂｏｄｙｏｆＰ

3、ＦＬＸ．ＰＦＬＸｗｅｒｅｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎａｎｄｏｖａｌｂｕｍｉｎｂｙｕｓｉｎｇＮ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅａｃｔｉｖｅｄｅｓｔｅｒｍｅｔｈｏｄｔｏｐｒｅｐａｒｅｔｈｅｉｍｍｕｎｅａｎｔｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＢＳＡａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＯＶＡ．ＴｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＰＦＬＸ－ＢＳＡｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈｈｉｇｈｔｉｔｅｒ．Ｔｈｅｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｉｍｍｕｎｅａｎｔ

4、ｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＢＳＡｈａｄｔｈｅｓｔａｃｋｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｅｄｉｃａｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｉｔｓｍａｘｉｍｕｍａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｗａｓ２７７．５ｎｍ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｖｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎＢＳＡｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＰＦＬＸａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｉｎａｎｉｍａｌｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．ＴｈｅｍａｘｉｍｕｎａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＯＶＡｗａｓ２７５ｎｍ，ｉｎｄｉｃａ

5、ｔｉｎｇｖｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎＯＶＡｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＰＦＬＸａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｔａｋｅｎａｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎｆｏｒｃｏａｔｉｎｇ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｎｔｉｓｅｒｕｍｔｉｔｅｒｓｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒａｎｄｒｅａｃｈｅｄｏｖｅｒ１∶３２０００，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｐｒｏｄｕｃｅｄ．Tｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａ

6、ｉｎｓｔＰＦＬＸｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｐｒｅｐａｒｅｄ，ｗｈｉｃｈｆｕｒｔｈｅｒｐｒｏｖｅｄｔｈａｔＰＦＬＸｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｕｐｌｅｄ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：pｅｆｌｏｘａｃｉｎ；ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ；ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ　　　　氟喹诺酮类药物是一类广谱高效抗菌药，几乎适用于临床常见的各种细菌感染性疾病。但由于该类药物的广泛应用，且常伴有不合理用药和滥用药情况的发生，因ＦＱs残留而产生的不良反应问题越来越多。ＦＱs残留不但对人体有直接的危害，如中枢神经系统、循环系统、消化系统、泌尿

7、系统、呼吸系统的不良反应、皮肤过敏反应及光敏反应、软骨毒性、生殖毒性、跟腱炎等［１］，更为严重的是动物性食品中较低浓度的药物残留通过食物链向人类传播，容易诱导人类致病菌对其耐药性的增强，从而不利于该类药物在人类疾病的治疗［２，３］。同时，耐药菌株传递所带来的危害性，使新开发的ＦＱs类药品的市场周期大大缩短，并且已发现某些ＦＱs具有潜在致癌性［４］。ＦＱs在动物性食品中的残留及耐药性问题已引起世界各国的普遍重视。一些国家、地区或组织对ＦＱs的使用和最高残留限量都做了规定，因此，检测与监控ＦＱs的残留，必须要建立一种高效、快速、灵敏

8、度高的检测方法。　　本研究以ＰＦＬＸ为研究对象，通过Ｎ－羟基琥珀酰亚胺活性酯法［５］将ＰＦＬＸ药物分别与牛血清白蛋白偶联制备免疫抗原，与卵清白蛋白偶联制备检测抗原。对合成的完全抗原，分别用紫外光谱扫描进行理化鉴定，用间接ＥＬＩＳＡ进行免疫学鉴定，用ＰＦＬＸ－ＢＳ