人斯钙素1在大肠杆菌中的重组表达与活性鉴定-论文.pdf

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1、军事医学2014年1月第38卷第1期MilMedSci，Vol38，No1，Jan，201439人斯钙素1在大肠杆菌中的重组表达与活性鉴定刘培培，董创创，刘广芝，孙君波，张菊新[摘要]目的通过原核表达的方法得到有活性的斯钙素1(STC1)重组蛋白。方法将优化合成的STC1DNA片段克隆到表达载体pET一32b(+)上，重组质粒转入大肠杆菌诱导表达，在变性条件下纯化包涵体，经透析复性得到可溶的斯钙素1融合蛋白，凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。Western印迹分析验证目的蛋白免疫活性。动物

2、实验检测目的蛋白的生物学活性。结果构建了pET．32b(+)一STC1表达载体，表达并纯化了sTC1融合蛋白包涵体，经复性、凝血酶切和纯化后获得可溶的目的蛋白。Western印迹分析验证正确。生物学活性检测表明重组STC1能增加大鼠排泄系统对磷酸盐的重吸收。结论获得了具有生物学活性的斯钙素1重组蛋白，为制备sTC1单克隆抗体和进一步研究STC1与肿瘤治疗的关系奠定了基础。[关键词]斯钙素1；原核表达；包涵体复性；磷酸盐重吸收[中图分类号]R711．75[文献标志码]A[文章编号]1674-9960(2014)叭

3、-0039-05DOI：10．7644／j．issn．1674-9960．2014．01．011Expressionandactivityidentificationofrecombinanthumanstanniocalcin1LIUPei-pei，DONGChuang—chuang，Guang．zhi，SUNJun—bo，ZHANGJu—xin(1．TheFirstAfiliatedHospital，Zhengzhou450000，China；2．ShandongInternationalBioasisPa

4、rkCompany，Yantai，Shandong264670，China；3．PeopleSHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450003，China)}Correspondingauthor．E-mail：zjxl106@tom．tom[Abstract]0bjectiveToobtainrecombinanthumanstanniocalcin1(STC1)withbiologicalactivityinEscheri．colicellsexpression．Me

5、thodsThegenewasclonedintopET32b(+)vectorbyfusedwiththioredoxinandHistag．E．coliBL21(DE3)competentcellsweretransfomedbytherecombinantvector．Afterrenaturation，thefusionproteinwasdigestedwiththrombinandintactSTC1proteinwaspurifiedfromthedigestedproteinusingNiion

6、affinitychromatography．Recombi—nanthumanSTC1proteinwasconfirmedbyWesternblotanalysisusinggoatanti—STC1antibody．ThebiologicalactivityofSTC1inratwasassayedusingstandardmethodforassessmentofrenalfunction．ResultsTherecombinanthumanSTC1fu—sionproteinissuccessfull

7、yexpressedinEscherichiacoli，thefusionproteinwaspurifiedbyaffinitychromatographyfromtheinclusionbodyandrenaturated．IntacthSTC1proteinwasreleasedbythrombindigestionandpurifiedbyNiionaffinitycol-umn．TheintactSTC1proteinswasconfirmedbyWesternblotanalysis．Ratbioa

8、ssayrevealedthatSTC1boostedphosphatereabsorption．ConclusionRecombinantSTC1proteinwassuccessfullyexpressedandhasnativebiologicalactivities．Thisproteincouldbeusedasanantigenforthepreparationofmono