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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%$年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-./-01-2$%%$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!人胸腺素!!在大肠杆菌中的融合表达修朝阳周穗菁俞璎陈常庆"（中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心，上海$%%$44）摘要利用基因工程表达的方法，在大肠杆菌中通过与D,6蛋白融合的方式高效表达了胸腺素!!前体基因，随后经亲和层析和,E强阳离
2、子树脂纯化相结合的方式，得到了胸腺素前体肽段4!肽和+3端未经乙酰化修饰的$"肽。融合蛋白表达量达到菌体总蛋白的4#FG7%F，样品肽的产量也达到了约$%%0HIJ（肽I发酵液）的产量。经质谱测定，分子量分别为4455和4%55。K;)KIL小鼠脾脏淋巴细胞体外测活表明，所构建的D,636!!融合蛋白和纯化后的产物对于淋巴细胞具有比较明显的增殖作用，其中+3端未经乙酰化的$"肽产物与4!肽产物活性相近，均对淋巴细胞具有明显的刺激增殖作用。关键词溴化氰降解，凝血酶加工，淋巴细胞测活，D,6中图分类号M8"5文
3、献标识码N文章编号!%%%34%5（!$%%$）%#3%#7!3%#胸腺素!（!6!!）是由动物或人胸腺组织分泌的去除多余的氨基酸。由于胸腺素!序列中并不含有一种多肽激素。它对于淋巴细胞的成熟、分化和免N2H与O-/残基，利用这一特性分别在其+3端引入［!］疫功能具有重要作用。由动物胸腺提取的胸腺肽了精氨酸（胰蛋白酶作用位点）或蛋氨酸（溴化氰化混合物（又称胸腺肽第五组份）早已用于临床以提高学裂解位点），相应的工程菌株分别被命名为N6!免疫功能和抗病毒作用，特别是对于乙型肝炎的治和O6!。这样，既可以通过溴化
4、氰裂解直接获得+疗具有一定的效果。6!!是胸腺肽混合物中最有效端未经乙酰化修饰的$"肽产物（O6!）；也可以通过［$］的组份。由于6!!是一个+3端被乙酰化的$"肽，凝血酶对N6!的加工，获得+端多余D)P3,-23N2H4因而易于用化学方法合成，产物的纯度已达到&"F个氨基酸的4!肽产物（N6!）。对于获得的4!肽产以上。化学合成的人6!!目前正用于对乙型肝炎和物，可以通过修饰JPC残基的方式，封闭胸腺素!内丙型肝炎的临床试验。有关人胸腺肽的药理学、药部的胰酶位点，然后再经胰酶作用，去除多余的4个物动力学
5、、临床效果和不良反应，以及使用方法和给氨基酸的同时获得游离的!3氨基，为今后利用化学［4G8］药剂量可参阅最近的相关文献报道。修饰（醋酐修饰）方法获得正确的$"肽产物创造条由于人胸腺肽!!的肽链较短，因而用基因工程件。活性测定表明，无论是融合蛋白（D,636!!）还是方法来生产6!!，不仅存在产量问题，而且还有基因4!肽前体或者+3端未经乙酰化修饰的$"肽，均具工程产物的后加工特别是+3端乙酰化问题。为了有与化学合成6!!相近的生物学活性，本文即报道［"］克服这一困难，颜真等人采用了四聚体6!!串联了这一研
6、究结果。表达方法，并证明串联表达的产物具有同样的生物!材料与方法学活性。我们实验室在完成了6!!的化学合成之后，又研究了6!!与谷胱甘肽巯基转移酶（D,6）在大!"!材料肠杆菌中的融合高效表达。由于表达系统本身在!"!"!菌种与质粒：大肠杆菌KJ3$!（CQ.<@CR##D,6蛋白和融合位点之间提供了凝血酶识别位点，/@=#（);>3.2(NK）:’［/2;S45.2(NK’);>T&);>T#O!#］以初步分割宿主蛋白和产物蛋白，但是分割后的产为本室保存，.D=;公司。
7、物会在+端多余$个氨基酸，不利于正确表达完整!"!"#酶类：V)-A(W酶、67S+N连接酶、限制酶、6;?的产物蛋白。因此，需要采用其他的后加工方法以酶购自宝灵曼公司，凝血酶购自,=H0;公司。收稿日期：$%%$3%43!"，修回日期：$%%$3%53$%。"通讯作者。6-)："53$!3578%%"&$-9/4%5；:;9："53$!3578%%$77；<30;=)：>?>@-ABC2>1*;>*>AH=)生物工程学报&*卷!"!"#主要试剂：基因片段在本室的!"#$%&核酸用&D倍柱体积的&U>"9洗
8、至没有蛋白洗脱为止。合成仪上合成。化学合成的’(端正确修饰的胸腺用洗脱液（&D,,-3/O谷胱甘肽，HD,,-3/OG;6<（:L素)*肽由本室采用+,-./0"1固相多肽合成方法合*TH））洗脱融合蛋白并收集。亲和柱用溶液!（:L成。23104056-7898:54;-<8="和9>98:54;-<8?4<0?3-@*TH，HD,,-3/OG;6<(LE3，DTH,-3/O’4E3）和溶液"树脂购自>54;,4
