人斯钙素1的重组表达及其对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUnVers时forthedegreeofMasterExpression，Puri6cationofRecombinantHumanstanniocalcinlinEscherichiacoliandtheinnuenceofSTC1ontheoVariancancerceU’sbiologicalbehaviorByPeipeiLiuSupervisor：Prof．JuxinZhangProfHuirongShiGynaecologyandobstricsThefirstAmliatedHospital，ZhengzhouUniVer

2、sityMay2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。除中文中已经注明引用的内容外，本人不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：吾酶磺日期：wf悔f月≥。日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进

3、行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：言、k参哳日期：bf悔S月弓。日摘要人斯钙素l的重组表达及其对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究研究生刘培培导师张菊新教授史惠蓉教授郑州大学第一附属医院妇产科河南郑州450052背景与目的在女性生殖系统恶性肿瘤中，卵巢癌的发病率位居第二位，但死亡率却居于首位。虽然随着肿瘤细胞减灭术的不断改善，以及铂类为基础联合紫杉醇化疗的广泛应用，使80％的初治患者获得临床缓解。但是，随之发生的化疗耐药、

4、早期复发令多年来卵巢癌的疗效并无显著改善。因此，探讨卵巢癌耐药机制和发生发展的机制，寻找有效的逆转耐药、抑制转移的治疗靶点，在卵巢癌的治疗中显得愈发重要而迫切。人类斯钙素1(StaIlIliocalcin1，STCl)表达于肾脏、卵巢、前列腺、甲状腺、结肠、骨骼和脾脏等多种组织中，以自分泌和旁分泌的方式参与调节多种生理和病理活动。目前有越来越多的证据显示STCl和多种肿瘤发生密切相关。有报道显示STCl可作为有效的诊断和微转移标志来检测胃癌、食管鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、乳腺癌和白血病等疾病。STCl过度表达预示着肿瘤预后较差。本课题组的前期研究首次证明STCl与卵巢癌发生发展相关，STCl

5、的过度表达使卵巢癌细胞对卡铂的化疗抵抗增加。肿瘤的增殖、转移和化疗抵抗会导致肿瘤的高死亡率，因此，进一步探讨STCl与肿瘤的关系，尤其是卵巢癌的关系有着重要的意义。前期研究还显示，STCl的抗凋亡作用可以被抗STCl的单抗中和，因此，STcl有可能用于卵巢癌临床诊断的标志物，并作为卵巢癌治疗的药物靶点。摘要多药耐药(multidmgresistaIlce，MDR)是指由一种药物诱发，同时对其他多种抗癌药物产生交叉耐药的一种现象，而这些抗癌药物的结构和作用机制可能完全不同的。引起多药耐药的机制包括：药物外排的增加，药物在体内的活化减少改变药物的作用靶点，损伤靶点的修复力增强，细胞周期停滞和细胞

6、凋亡的抑制等。其中ABC转运蛋白超家族(ATP-bindingcass甜e仃a11sportersup洳ily)成员介导的药物外排在MDR中起了重要作用，也是目前国内外研究的热点之一。当化疗药物进入细胞后，药物与ABC转运蛋白超家族成员结合，能将药物“泵"出细胞，而这种排出泵的作用是借助于ArP供能，从而使化疗药排出细胞，降低细胞内药物浓度，导致肿瘤细胞耐药。该家族参与肿瘤多药耐药的主要成员为MDRl(多药耐药基因)、MRP(多药耐药相关蛋白)、BCI冲俘L腺癌耐药蛋白)等亚家族。本研究共分两个部分：第一部分是STCl基因表达载体的构建，以及原核表达载体在大肠杆菌中的表达、包涵体的纯化和复性

7、。通过检测STCl蛋白对大鼠尿液中磷酸盐含量的影响来检测STCl蛋白的生物学活性。第二部分主要是STCl对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究。通过STCl对细胞增殖、对化疗耐药及耐药相关基因的表达情况对其功能进行研究，试图探讨STCl对卵巢癌细胞中耐药基因相对表达水平变化，从而找出其引起耐药的相关基因，也为找出STCl引起耐药的相关信号通路打下基础，为制备STCl的单克隆抗体药物及探讨STCl蛋白作为卵巢癌诊断标