一种简便实用的大鼠Kupffer细胞的分离与鉴定方法-论文.pdf

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1、·106·中西医结合肝病杂志2014年第24卷第2期doi：10．3969／j．issn．1005-0264．2014．02．016一种简便实用的大鼠Kupffer细胞的分离与鉴定方法姜雪强冯红萍田德英1．湖北医药学院附属东风医院感染科(湖北十堰，442000)2．华中科技大学同济医院感染科．摘要目的：研究一种简便实用的大鼠Kupffer细胞(KCs)的分离与鉴定方法。方法：原位两步灌流法对大鼠肝脏进行冲洗消化；利用Pereoll液进行不连续密度梯度离心分离KCs；；选择性贴壁纯化KCs；台盼蓝染色法鉴定细胞存活率；吞噬实验鉴定细胞功能；

2、ED1单克隆抗体免疫荧光细胞化学鉴定KCs；显微镜下观察KCs形态变化。结果：获取的KCs数量为(2．41±0．32)×10／只，其中活细胞数量占(92．3±2．12)％；吞噬实验显示(95．2±2．58)％的细胞内存在碳素颗粒；免疫荧光化学检测证明KCs纯度为(96．3-4-1．46)％；在显微镜下观察KCs形态，36h细胞形态变得不规则，3d后呈星形或多角形，体外培养可以存活7—10d。结论：此种KCs分离方法操作相对简便，获取的细胞数量、活性功能、纯度等方面均能达到进一步的实验要求，值得推广。关键词Kupffer细胞；细胞分离；细胞

3、鉴定AsimpleandpracticalmethodforisolatingandidentifyingratliverKupfercellsJIANGXue-qiang。，FENGHong-ping，TIANDe—ying2．1．DepartmentofInfectiousDiseases，DongfengGeneralHospital，HubeiUniversityofMedicine(ShiyanHubei，442000)China2．TongfiHospital，HuazhongUnive~ityofSc&ceandTechno

4、logy(WuhanHubei，430022)ChinaAbstractObjective：TointroduceasimpleandpracticalmethodforisolatingandidentifyingratliverKupffercells(KCs)．Methods：Theliverwasperfusedanddigestedinsitubytwowaysofliverperfusion．DiscontinuousdensitygradeintcentrifugationinPercollwasusedtoisolatin

5、gKCs．KCswaspurifidebyselectiveadherence．UsingtrypanbluedyemethodtomeasureactivityofKCs，phagocytosisexperimentstofunction，ED1immunofluorescencecytoehemistrytopurity．MorphologicalchangesofKCswereobservedundermicroscope．Results：KCsactivitywasmeasured：thenumberofalivecellswas

6、(92．34-2．12)％．T0talamountofKCsisolatedineachratwas(2．41±0．32)×10inaverage．KCsphagocyticexperimentshowedthatthenumberofcells(95．24-2．58)％hadfunction．ED1immunofluorescenceeytoehemistrystainingshowedcellpuritywas(96．34-1．46)％．ThemorphologyofKCsbecameirregularafter36hours，spi

7、ndleorpolygonalafter3days．KCscouldkeepalive7—10daysinvitroculture．Conclusion：TheisolationmethodsofKCswasrelativelysimple．Theacquirecellswerequiteuptothestandareforfurtherexperimentsinquantity，activityandpurity．KeyWordsKupfercells；cellisolation；cellidentification肝脏Kupfer细胞

8、(KCs)是机体单核一巨噬细胞系统的最两步原位灌注法结合Precoll密度离心法成功分离了大鼠KCs，大组成分，数量约占80％一90％，在机体免疫、内环境稳定其纯度活性功能均达到实验要求，为相